鲍曼不动杆菌院内感染株的耐药及同源性分析

 鲍曼不动杆菌(AB)由于其对营养无特殊要求，抵抗力强，在干燥物体表面可存活时间长,在住院病人中定植率为75%［１］,所以极易播散并引起院内感染。同时，由于长期抗生素选择压力使多重耐药株明显增加,特别是对碳青霉烯类的耐药,给临床抗菌治疗带来困难。作者对分离的223株鲍曼不动杆菌进行了抗菌药物敏感性试验，并对27株耐碳青霉烯类抗生素的菌株进行基因分型，结合临床资料分析感染源头及途径，现报告如下。

 

　　1  临床资料

 

　　1.1  菌株来源

 

　　223株AB均分离自2006年1至12月本院住院病人，菌株使用ATB细菌鉴定仪（法国BioMerieux公司）鉴定。标准菌株为大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853。

 

　　1.2  仪器和试剂

 

　　水解酪蛋白(Mueller-Hinton,MH)琼脂购自法国梅里埃公司，哌拉西林(PIC)、哌拉西林/他唑巴坦（TZP）、头孢哌酮/舒巴坦（CPS）、头孢他啶（CAZ）、头孢吡肟（FEP）、氨曲南（ATM）、亚胺培南（IPM）、美洛培南（MER）、庆大霉素（GEN）、阿米卡星（AKN）、环丙沙星（CIP）、复方新诺明（TSU）头孢噻肟（CTX）等药敏纸片均为OXOD公司生产， MERCK公司的蛋白酶K，Seakem Gold琼脂糖，DNA限制性内切酶Sma-I为宝生物工程（大连）有限公司产品。

 

　　1.3  药敏试验

 

　　采用K-B法测定13种抗菌药物的敏感性，并根据CLSI/NCCLS 2006年版［２］要求进行抗生素敏感性判断。

 

　　1.4  脉冲场凝胶电泳

 

　　参考《分子细菌学方法与临床应用》［3］，切1～3mm胶块，浸入150μl酶切体系中（其中含Sma-I30IU），37℃酶切过夜。使用电泳仪（Bio-rad）,电压6V/cm，电泳时间16h，脉冲参数0.22～18s，120°，电泳温度14℃。电泳结束后，将凝胶取出，用0.5μg/ml的Goldview染色30min,去离子水脱色30min，用凝胶成像仪读胶分析。

 

　　2  结果

 

　　2.1  抗菌药物敏感性试验

 

　　见表1。表1  223株鲍曼不动杆菌对13种抗菌药物的药敏结果（略）

 

　　2.2  PFGE结果

 

　　PFGE 电泳图(图1)，聚类分析结果(图2)。聚类分析提示27株菌株有7个克隆，其中3、4、6、9、10、11、12、13、14、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27等19株为同一克隆（A1型）。1号和2号株为同一克隆（A2型），16号和17号株为同一克隆（A3型）， 5、7、8、15各自为不同克隆。

 

　　2.3  临床资料分析

 

　　27株耐碳青霉烯类抗生素的菌株来自呼吸科3株、神经外科7株、重症监护室17株。标本来源：来自血液2株、静脉导管头1株，其余均为痰标本。重症监护室的17株菌株为A1、A2、A3克隆，神经外科7株为A1克隆。病人因病情危重均不可避免的长时间住院，同时又使用人工气道或各种侵入性操作、免疫抑制剂、广谱抗生素等。

 

　　3  讨论

 

    鲍曼不动杆菌系条件致病菌，普遍存在于环境中，是临床标本和院感监测中最常分离到的革兰阴性非发酵菌。近年来，鲍曼不动杆菌感染率不断上升，已成为重症监护室、神经外科和呼吸科抗感染治疗最棘手的问题。本试验中,223株鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美洛培南的敏感性最高(87.89%),但已出现耐碳青酶烯类抗生素的菌株，由于舒巴坦对鲍曼不动杆菌有独特的抑酶活性,使CPS具有78.48%的敏感性明显比TZP高。第三、四代头孢菌素及ATM的耐药率为58.74%～70.40%,青酶素类、氨基糖甙类、TSU、CIP的耐药性均很高。 2002年1至12月全国细菌耐药性监测网所属57家三级甲等医院调查发现，AB菌临床分离率为4.2%［４］，并发现AB菌对17种临床常用药物的耐药率4.3%～86.9%。解放军总医院对呼吸机相关肺炎的病原学和耐药性监测发现，AB菌分离率达11.5%,对15种临床常见药物的耐药性更高达10.5%～100%［５］。

　　

    本PFGE聚类分析提示，27株菌株有7个克隆，其中3、4、6、9、10、11、12、13、14、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27等19株为同一克隆（A1型），1号和2号株为同一克隆（A2型），16号和17号株为同一克隆（A3型）， 5、7、8、15各自为不同克隆。对比临床资料发现重症监护室的17株菌株为A1、A2、A3克隆，神经外科7株为A1克隆，这种在同一时间、空间分布的集中趋势，认为是大规模的暴发流行，需联合院感管理部门进一步监控。PFGE高重复性的分辨能力，其分型结果是控制院内感染的重要基础，可以帮助临床发现潜在的危险因素，进而及时切断流行菌株的来源及传播途径。当发现相似耐药谱的鲍曼不动杆菌的流行，就必需采取严格的措施，防止交叉感染。因鲍曼不动杆菌耐受肥皂，所以应注意无菌观念，防止造成医源性感染。严格消毒呼吸机管道，定期取样送检，同时应加强抗菌药物的合理使用和细菌耐药性的检测及监测，是防止和延缓鲍曼不动杆菌耐药率增长的必需措施。

作者：应建飞 陈云波 俞燕红    作者单位：315040 浙江省宁波市鄞州人民医院 310003 浙江大学医学院附属第一医院

 

【参考文献】

  　　1 张樱. 不动杆菌感染及耐药机制的研究进展. 国外医学流行病学传染病学分册，2005,32(2):109～１12．

　　2 National Committeefor clinical laboratory standard. Perfermance standards for antimicrobial susceptibility testing. Eleventh informational Supplement. M100-S15 Vol 25. Pennsylvania:NCCLS, No.1,January 2006.

　　3 Neil Woodford.Alan P.johnson. 分子细菌学方法与临床应用.西安：世界图书出版公司，1998.43～47.

　　4 马越，李景云，张新妹，等.2002年临床常见细菌耐药性监测.中华检验医学杂志，2004，27（1）：38～45.

5 蔡少华，张进川，俞森洋，等.呼吸机相关肺炎的病原学和耐药性监测.中华医院感染学杂志，2004，14（4）：365～368.