应用全自动微生物分析系统对ESBLs菌株的检测及分析

ESBLs是一类能裂解大多数青霉素`头孢菌素和氨曲南的β-内酰胺酶，很容易引起医院的爆发流行，多数由大肠埃希氏菌和肺炎克雷白氏菌产生，ESBLs阳性菌株常多重耐药，因此，实验室检测ESBLs细菌至关重要，利用Vitek分析系统的药敏卡GNS-NT可检测出ESBL菌株，且同时可得到十种药敏结果。

 

一　材料

1 标本 收集我院自1999-2000年从临床分离的大肠埃希氏菌81珠和肺炎克雷白氏菌124株，所有菌株均用法国Vitek的GNI试卡鉴定确认（鉴定率在95%以上）。

2 质控菌株 大肠埃希氏菌ATCC25922，肺炎克雷白氏菌ATCC700603。

3 主要试剂 筛选及确证实验用的M-H琼脂及药敏纸片均购自梅里埃公司。

二　方法

1 上机检测：将以上菌株严格参照GNS-NT药敏卡说明书操作，上Vitek全自动分析系统。仪器检测ESBLs的4个检测孔（头孢噻肟与头孢噻肟+棒酸，头孢他啶与头孢他啶+棒酸）的生长浊度变化。当不加棒酸孔的浊度>50%时,判定为ESBL阳性。同时加F5卡以观察更多药物的敏感情况。

2 筛选试验：将收集的菌株做纸片法药敏试验，按NCCLS推荐的纸片法筛选ESBLs的标准进行筛选。

3 确证试验：将可疑菌株用头孢他啶`头孢他啶+棒酸及头孢噻肟`头孢噻肟+棒酸纸片做药敏试验，含棒酸的和不含棒酸的纸片抑菌圈直径相差大于5mm可判定为阳性。　　　　

 

三 结果

1 上机检测：124株肺炎克雷白氏菌检出ESBLs阳性菌32株，占待检菌26%，81株大肠埃希氏菌检出 ESBLs阳性10株，占待检菌12%。

2 筛选试验；筛选出可疑菌株78株，其中大肠埃希氏菌25株，肺炎克雷白氏菌53株。（质控均在合格范围内）。

3 确证试验：筛选出的78株可疑菌株，经确证43株为产ESBLs株，其中33株为肺炎克雷白氏菌，10株为大肠埃希氏菌。

四 结果分析

1 上机的ESBLs阳性菌42株做确诊试验后都为阳性，特异性为100%，有一株确证试验为ESBLs阳性细菌，上机时是阴性，且确证试验中此菌株含棒酸和不含棒酸间的抑菌圈直径相差刚刚达到5mm。这样Vitek分析系统的GNS-NT卡基本上可以检测出所有的ESBLs菌株，其灵敏性为97.7%。

2 GNS-NT卡除可以检测ESBL外，同时还能得到10种抗生素的药敏结果，再加上F5卡，增加了可选药物，以便及时为临床提供敏感抗生素。在全自动分析系统中药敏结果有专家系统提示并修正，一旦细菌被检出是ESBLs阳性菌株，如果对青霉素`一`二`三代头孢菌素和安曲南中任何一种显示敏感，则系统自动发出“三级专家系统”警报，提示这些药物对ESBLs菌株活性下降。经统计ESBLs阳性菌对亚按配能的敏感率为96.7%，对阿米卡星敏感率为14%，对呋喃坦啶敏感率为12%对其他药物敏感率极低。

五 讨论 

    用Vitek32全自动分析系统及其药敏卡可以检测绝大多数的ESBLs菌株，其敏感性高，特异性好，方法简便，结果准确，在测出ESBLs的同时还可以得到多种抗生素的药敏结果，为临床用药提供可靠依据。总之，一旦检出ESBLs，就应该立即按《中华医学检验杂志》推荐的治疗标准用药：（1）碳请霉烯类抗生素：如亚胺配能，（2）氨基糖苷类抗生素：如阿米卡星，（3）头霉烯类抗生素：如头孢西丁，（4）β-内酰酶抑制剂。首选亚按配能，可采用（2）+（3）或（2）+（4）的联合用药。

   经上机检测到的42株产ESBLs细菌在医院的分布较局限，脑外科分离到33株，占总数（42株）的87.9%，占全年从脑外科分离到的细菌（52株）的63%，且多数仅对亚按配能敏感，可见其感染已很严重，这表明，ESBLs菌株的耐药性不仅诱导产生，而且还有“传染性”，可以从一个产酶耐药株转移到另一个敏感菌株上使其也耐药。其余的ESBLs菌株在呼吸内科分离到9株，其他病房均未检出ESBLs，分布较局限说明此菌还没有在全院范围内传播。

 

参考文献

1 倪语星, 质粒介导的超广谱β-内酰胺酶的耐药性问题及检测[J].．中华医学检验杂志1999,22增刊:19-20．

2徐英春， 三种方法检测超广谱β-内酰胺酶敏感性比较[J]. 中华医学检验杂志1999,22:355-357．

3.Sirot D. Extended-spectrum plasmid-mediated betalactamases[J].J Antimicro Chemother1995,