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阻止切片的霉菌染色方法比较



录入时间:2011-2-23 9:19:49 来源:中华检验医学网

因病理组织切片常规苏木紫伊红染色(下简称常规染色)尚能辨认霉菌,所以组织切片的霉菌染色体未得到应有的重视。现将笔者过去霉菌感染的组织切片,进行了6种霉菌染色比较,结果如下。
 
 
  1 材料与方法
    
  从过去霉菌感染或可疑霉菌感染的19例尸检和5例活检标本中(主要是念珠菌\曲霉菌及毛霉菌感染,也有个别的放线菌及隐球菌感染),选出有关的组织蜡块,重作厚4μm切片,脱蜡后分别进行革兰染色,PAS染色,Grialey氏醛品红-PAS法染色(1.2.3),Grocott-Gomori二氏乌洛托品硝酸银法染色(4.5),Mallory氏纤维蛋白改良法(2)及常规染色。
   
  PAS染色胳改用0.2%淡绿代替苏木紫作对比染色。Grialey氏醛品红-PAS染色法,用1%高碘酸氧化30min代替5%铬酸氧化。
 
     Grocott-Gomori二氏乌托品硝酸银染色法,亦用1%高碘酸氧化30min代替5%铬酸氧化,并以0.2%淡绿代替苏木紫作对比染色。
    
  2 结果
    
  革兰染色切片内,念珠菌为蓝色(革兰阳性),曲霉菌和毛霉菌则为红色(革兰阴性),但毛霉菌着色较浅,结构不清。因系中性红对比染色,细胞核亦染为红色,与霉菌孢子鉴别有困难.放线菌及隐球菌均未着色。
   
  PAS法染色,以淡绿作对比染色较苏木紫为佳,霉菌均显红-紫色菌丛中隔及孢子均明显可见。
     
  Grialey氏醛品红-PAS法染色,霉菌丝及孢子均染成程度不同的红-紫红色。但背景亦为浅紫色,对比不鲜明,但霉菌着色深,镜下观察仍较常规紫色者为优。
     Grocott-Gomori二氏乌洛托品硝酸银染色法,霉菌均染成黑色,当染色深浅适当时,切片中菌丝的壁,孢子的包膜及菌丝中隔均呈深黑色,菌丝内部显暗褐色,结构清楚,改用淡绿对比染色,较苏木紫伊红染色为鲜明,适合观察和摄影。
     Mallory氏纤维蛋白改良法,霉菌染为蓝-深紫色,背景是苏木紫及伊红染色,因此近似常规染色,只是霉菌较深。
     在常规染色中,霉菌的孢子及菌丝一般均染成浅蓝色,较细胞核为浅,因为是蓝色,有时孢子难以与细胞核或已破碎的细胞核鉴别,而菌丝也长不能和已挤压成丝状的细胞核鉴别。所以,常规染色和其他霉菌染色比较,发现常规染色存在以下问题:(1)每张切片中所见到霉菌的数量远不及其他霉菌染色多;(2)在常规染色中,有3例未找到霉菌的切片,做了霉菌染色即能证实有霉菌存在,如1例皮肤烧伤的病例,临床怀疑有霉菌感染,常规染色不能找到霉菌,而霉菌染色证实有毛霉菌感染。1例患者用了大量的激素及抗生素后死亡,肾脏有一脓肿,内有多核巨细胞,不象化脓性细菌感染。曾疑为霉菌所致,常规染色未能找到霉菌,经霉菌染色后,证实脓肿内有念珠菌。存在另1例致死性中线肉芽肿患者,用了激素等治疗后,肺内有念珠菌\曲霉菌及毛霉菌混合感染,死于十二指肠降部穿孔,穿孔部有坏死及炎症,疑为霉菌所致,但切片曾多处会诊,均因找不到霉菌而不能肯定.这次做霉菌染色,在穿孔边缘及坏死区有少数念珠菌,肯定是霉菌感染所致的穿孔;(3)常规染色能见到霉菌数量少,且易与其他组织结构混淆,造成分类错误或遗漏,经霉菌染色纠正分类错误或遗漏的有7例,多数是毛霉菌与念珠菌混淆。有1例肺内常规染色仅见到多数孢子,未见菌丝,当时不能分类,只能诊断酵母菌类霉菌感染,经霉菌染色后,发现有菌丝存在,只不过量少而已,而改正为念珠菌感染。
   
  1年后,重新观察切片时,常规染色及Grocott-Gomori氏洛托品硝酸银染色均无褪色,其他染色均有不同程度的褪色。淡绿对比染色几乎完全褪色。    
 
作者:谈勤明 胡有长  中华医药杂志 2004年12月 第4卷 第12期
作者单位:330006江西医学院形态中心教研室

 

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