抗生素敏感性试验

近年来各种抗生素的大量应用，尤其广谱抗生素的滥用，造成耐药突变菌株的大量出现，经验用药失败率高，大剂量用药易造成药物中毒。检测病原微生物对抗生素的敏感性是临床微生物实验室最重要的任务之一；其目的是指导临床上治疗某个病人选择最佳的抗生素，避免由于用药不当，产生耐药菌株。由于新的病原体和新的耐药机制的出现，对实验室的药敏提出了更高的要求：必须提供准确的数椐，作为临床治疗的参考。以下就药敏方法、实验操作、结果报告加以讨论。

 

　　目前临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法、稀释法、抗生素浓度法、自动化仪器等。许多临床实验室使用纸片扩散法作为常规的药敏试验，其优点是：操作简单，重复性好，成本低，能根据临床需要选用抗生素，药敏结果解释（敏感、耐药、中介）易为临床医生理解，缺点是不适用于生长缓慢的菌株及一些苛养菌；稀释法是一种可靠的标准化的方法，可作为评价其他药敏试验方法的参考方法，也可准确地检测一些纸片扩散法检测不出的苛养菌、非发酵菌和厌氧菌，稀释法的主要缺点是操作繁琐；抗生素浓度法的成本太高，不适合常规试验应用；自动化仪器需要仪器才能进行。以下主要讨论纸片抗散法。

 

　　1原理

 

　　纸片扩散法是将含有定量抗生素的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加抗生素的浓度呈对数减少,在药物浓度到达的范围内对此药敏感的细菌不能生长而形成透明的抑菌圈，不同细菌形成的抑菌圈各不相同，抑菌圈的大小反映了测试菌对该药的敏感程度。

 

　　2药敏纸片

 

　　生物公司提供，应保存于2 ℃~8 ℃或-14 ℃以下，β内酰胺类抗生素的纸片应密封冷冻保存以保持效力，纸使用前应取出平行至室温以减少冷凝，纸片应在有效期内使用，用后放回冰箱保存。

 

　　3琼脂培养基

 

　　NCCLS推荐使用MH培养基，其优点如下：绝大多数非苛养菌生长良好，批间重复试验较好，对磺胺、甲氧苄啶和四环素的抑制少。MH培养基可购买成品或干粉培养基，评价一批新的MH培养基时，需用甲氧苄啶/磺胺甲恶唑纸片来检测肠球菌ATCC33186的敏感性，合格的培养基应产生20 mm的抑菌圈，若质量有问题则会产生直径小于20 mm的抑菌圈或无抑菌圈等，不能用加有羊血的MH培养基进行常规的药敏试验，这会导致某些菌种抑菌圈的改变。

 

　　4操作方法

 

　　应用KB法划线接种，用灭菌棉试蘸取试验菌涂抹在MN培养基表面，要均匀涂抹3次，每次应转动60度，放置室温数分钟待干燥后以无菌镊子取各抗生素纸片贴于表面，各纸片间距为15 mm,纸片一经贴入药物会立即扩散，因此纸片放入后不能再移动，贴好后15 min内放入35 ℃温箱，同时因药敏解释标准是建立在空气培养基础上的，某些药物如氨基糖苷类、四环素、大环内酯类易受CO2的影响而有较大改变，故常规药敏试验不应放于CO2温箱中。

 

　　5结果

 

　　报告一般细菌的药敏24 h即可作出报告，合格的药敏应是平皿内细菌生长的平面是连续的，若可见明显单个菌落生长则是接种菌液浓度太小，需重新接种；抑菌圈可用直尺读最近的整毫米数，当检测葡萄球菌或肠球菌，在周围的抑菌圈内有明显菌落生长，则提示耐药，其他细菌有此现象，则可能是菌种不纯，需重新试验；变形杆菌属的菌株会长于药物的抑菌圈内，若明显的抑菌圈内有薄膜样爬行生长可以忽略；对链球菌应测其抑菌圈而不是溶血圈；如何发出药敏结果的报告是很重要的，目前药敏结果的报告形式有两种：解释性分类报告（即敏感、中介和耐药）和定量MIC值报告，若报告MIC值时需同时附上解释性分类报告；需要强调的是某些菌种或菌群在进行药敏试验时对抗生素的选择和报告有特殊要求；产超广谱β内酰胺酶（ESBLS）的菌株在常见的体外药敏试验中，对氧米诺头孢菌素和氨曲南等抗生素表现为中敏、部分敏感甚至全部敏感，而在感染患者体内表达为临床意义的耐药，由此造成治疗的失败；NCCLS规定对于肠球菌属：头孢菌素、氨基糖苷类（筛选高水平面耐药除外）、克林霉素和甲氧苄啶/磺胺甲恶唑可以在体外显示活性而临床上无效，故这些药敏不应报告为敏感；对于甲氧西林耐药的葡萄球菌（MRS）应报告对所有β内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯类、克林霉素和四环素耐药；对于沙门氏菌属和志贺菌属的分离株只有氨苄西林、一种喹诺酮类药物和磺胺甲恶唑/甲氧苄啶可用于常规试验的报告,一、二代头孢菌素和氨基糖苷类等体外有可能有活性,但治疗却无效所以上述药物不应报告为敏感。总之药敏试验的结果应以临床治疗为目的。

作者：何卫恒，段纯，汪崇，梁绮文 （深圳市妇幼保健院，广东 深圳 518028）