不同厂家鲎试剂对细菌内毒素限量检查的影响初探

中国药典2000年版沿用鲎试剂法用于0.9%氯化钠注射液等药物的细菌内毒素限量检查。药典规定0.9%氯化钠注射液中细菌内毒素量不得超过0.5Eu*ml－1。在实际工作中我们通常使用标示灵敏度均为0.5Eu*ml－1的厦门、福州两地的鲎试剂厂产品。在使用中我们通过鲎试剂灵敏度测定实验发现由于生产厂家不同，部份鲎试剂的实测灵敏度与标示灵敏度有差异而导致检测同一检品时，用标示灵敏度相同的鲎试剂出现不同结果，因而可能引起结果判断差异。

1　实验材料

　　厦门鲎试剂灵敏度标示量0.5Eu*ml－1，0.1ml*支－1，批号20010605。福州鲎试剂灵敏度标示量0.5Eu*ml－1，0.1ml*支－1，批号为20011110。细菌内毒素工作标准品10Eu*ml－1，批号20011106，超纯水批号为20010906。实验前所用器皿需经处理，去除可能存在外源性内毒素。常用的方法是250℃干烤至1小时，也可用其它适宜方法，并应确证不干扰细菌内毒素的检查。

2　实验及结果

　　按中国药典2000年版规定进行鲎试剂灵敏度复核，结果：内毒素浓度(Eu*ml－1)：1，0.5，0.25，0.125；内毒素加量(ml)：0.1，0.1，0.1，0.1；鲎试剂加量(ml）：0.1，0.1，0.1，0.1；福州鲎试剂反应管组1：+，+，－，－；组2：＋，＋，－，－；组3：＋，＋，－，－；组4：＋，＋，－，－；厦门鲎试剂反应管编组1：＋，＋，－，－；组2：＋，－，－，－；组3：＋，－，－，－；组4：＋，－，－，－。其阴性对照组实验结果为阴性。福州鲎试剂灵敏度测定值为λc＝1－1g(Σx)/(4)＝0.5Eu*ml－1；厦门鲎试剂灵敏度测定值为λc＝lg(zx)/(4)＝0.71Eu*ml－1；中国药典规定鲎试剂灵敏度λc在0.5λb－2λb之间即符合规定也是说复核结果应在标示值的50%～200％之间。以上两种不同厂家的鲎试剂均符合规定要求。

　　用上述两种鲎试剂按药典法对本院制剂0.9%氯化钠注射液(批号为20020225)行细菌内毒素限量检查结果：厦门鲎试剂，检品批号20020225，结果“－”；福州鲎试剂，检品批号20020225，结果“＋”。平行重复以上实验，结果均一致。福州鲎试剂为20020225批号的0.9%氯化钠细菌内毒素限量检查判定为不符合药典规定，而厦门鲎试剂对同一产品判定为符合规定，结果相互矛盾。

3　讨论

　　以上实验提示由于不同厂家鲎试剂标示灵敏度相同而实际灵敏度不同导致同一样品产生完全不同的检测结果。中国药典2000年版规定0.9%氯钠注射液细菌内毒素含量不得超过0.5Eu*ml－1，即小于或等于0.5Eu*ml－1，因此我们通常采用标示灵敏度为0.5Eu*ml－1的鲎试剂进行检测。但是，当实际灵敏度与标示灵敏度产生误差时有可能导致检测结果的假阳性或假阴性。在本实验中批号20010605厦门鲎试剂的实测灵敏度为0.71Eu*ml－1，也就是说对于浓度小于0.71Eu*ml－1的细菌内毒素不敏感。对于含细菌内毒素为0.5Eu*ml－1～0.71Eu*ml－1的样品实测结果仍显示阴性，这就是我们通常所说的假阴性，这是实测灵敏度小于标示灵敏度λc＞λb的情况，当实测灵敏度大于标示灵敏度即λc＜λb时，结果就易出现假阳性，如950708批号福州鲎试剂λc＝0.25Eu*ml－1对0.9%氯化钠注射液出现假阳性。实验结果表明，在可能的情况下，我们应选用标示灵敏度与实际灵敏度相符的鲎试剂进行检测，避免出现因鲎试剂本身造成的判断失误，对于λc＜λb或λc＞λb的情况应该对供试品进行稀释或浓缩后进行检测。稀释(浓缩)倍数n＝(x)/(n)式中λ即该鲎试剂实际灵敏度(Eu*ml)－1，x即供试品的内毒素限度(Eu*ml)－1。

　　灵敏度一定的某批鲎试剂与不同浓度的内毒素形成凝胶反应的时间与浓度间存在下列关系logC＝blogT＋loga［1］式中C即内毒素浓度(Eu*ml)－1，T即生成凝胶的时间(分钟)，a、b即常数。不同灵敏度的鲎试剂a、b值不同，可按下列方法测定：取不同浓度的内毒素，分别测定与某批鲎试剂生成阳性反应的时间，每一浓度不少于两管，分别取对数后，求lgC与lgT所成回归线的斜率b及截距lga。利用该批鲎试剂测定样品时，根据生成凝胶反应所用的时间即可求出样品的内毒素含量，对λc与λb不相符的鲎试剂亦可用此法进行限量检测，结果更精确。为了方便使用，建议法定部门和生产单位应注意鲎试剂的质量检查。

作者：泉州市人民医院(362000)　陈丽芸    福建医药杂志 2002年第24卷第3期

 

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