芒果核提取物体外抑菌及急性毒性实验研究

【摘要】  　　目的研究芒果提取物的体外抑菌效果及其使用的安全性。方法采用二倍稀释法及琼脂扩散法，观察芒果核提取物对常见肠道感染致病菌的体外抑菌作用；用小鼠空腹经口灌胃给予芒果核提取物,观察小鼠出现的毒性反应、剂量毒性效应的关系及主要靶器官毒性反应的性质和程度。结果芒果核提取物对标准和耐药志贺痢疾杆菌、福氏痢疾杆菌、大肠埃希菌有不同程度体外抑菌作用；小鼠灌胃最大耐受量40 g/kg，相当于临床用量的50倍。结论芒果核提取物对常见3种肠道感染菌具有较明显的体外抑菌作用及具有良好的安全性。

【关键词】  芒果核提取物 体外抑菌作用 最低抑菌浓度急性毒性实验

　　Abstract:ObjectiveTo study bacteriostasis and its practical safe of Mango seed extract in vitro.MethodsThe in vitro bacteriostasis of Mango seed extract, double-diluted and agar-diffused, on common intestinal infection pathogenic bacteria was observed. Mice were orally adminstered Mango seed extract and toxic reaction, dose-toxic effect relationship and the toxic reaction of the major target organs were observed.ResultsMango seed extract possessed in vitro bacteriostasis in different degree on standard and drug fast Bacillus shigae, Bacillus dysenteriae, maximal tolerated dose of intragastric administration for mice was 40 g/kg, equivalently 50 times clinic dosage.ConclusionMango seed extract possesses in vitro bacteriostasis and is favorable safe on 3 types of common intestinal infection bacteria.

　　Key words:Mango nuclear extract;  In vitro inhibiton;  MIC;  Acute toxicity

    随着抗生物药物的被广泛应用，微生物耐药性已成为全球关注的严峻问题。由于多重耐药菌、多重感染以及许多新的病原微生物引起的感染对人类健康造成极大威胁，且日趋严重，我们从临床工作中观察到部分纯天然抗生物药物有很好的抗菌疗效。为挖掘芒果核的药用作用,现将其提取物作体外抗菌作用的研究，同时为了确保其安全性, 根据中药临床前毒理学评价的指导原则, 笔者对芒果核进行了急性毒性实验研究, 为开发利用芒果核资源提供科学根据及临床应用提供一定药理学基础。现报告如下。

　　1  材料

　　1.1  芒果核提取物的制备将南宁地区生长成熟芒果核除去坚壳及衣，日光晒干，取50 g切碎，加水200 ml浸泡，30 min后加热煮沸，文火15 min滤出，再加水100 ml，按上述方法再次操作滤出药液，合并两次药液，用文火浓缩至50 ml，制成原液备用。

　　1.2  菌株标准志贺痢疾杆菌、福氏痢疾杆菌和大肠埃希菌均由广西医科大学微生物教研室提供，耐药志贺痢疾杆菌、福氏痢疾杆菌和大肠埃希菌均由广西壮族自治区妇幼保健院检验科细菌室提供，常规牛肉膏、水解酪蛋白培养基37℃培养24 h后吸取菌液用培养基稀释，用血细胞计数板计数将菌悬液调整为约106个/ml备用。

　　1.3  动物清洁小鼠40只, 雌雄各半, 体重18～ 22 g, 由广西医科大学实验动物中心提供。

　　2  方法

　　2.1  最低抑菌浓度（MIC）的测定采用二倍稀释法测定芒果核提取物MIC，即取12支无菌试管编号，1～10号为一定梯度芒果核提取物含菌液，11号取菌悬液1 ml为不加试验药物的菌液对照管，12号管取芒果提取物1 ml为不加菌悬液的药物对照管，稀释后的芒果核提取物最终浓度为500，250，125，62.5，31.2，15.6，7.8，3.9，1.95，0.98 mg/ml摇匀后置于37℃的恒温箱中培养24 h后观察结果。

　　2.2  判定标准首先观察11号菌液对照管细菌呈混浊状生长，而12号药物对照管无细菌生长，呈透明状的前提下，以不出现混浊的最低芒果核提取物浓度为其MIC。

　　2.3  抑菌实验将标准和耐药志贺痢疾杆菌、福氏痢疾杆菌、大肠埃希菌分别用取菌环致密接种到血平板营养基表面,以无菌操作将已用芒果核提取物浸泡的带有药液的直径0. 4 cm的滤纸片贴到培养基上, 37℃培养24 h,观察测量抑菌环直径。重复3次,取其平均值。

　　2.4  急性毒性实验动物采用雌、雄分别随机均衡分组法 , 共分两组, 每组20只，雌雄各半。采用空腹经口灌胃给药。各组药物浓度为最大浓度, 灌胃体积相同, 均为每只每次给药0.4 ml, 每隔12 h给药1次，共给药两次，按急性毒性实验常规方法灌胃［1］，测定芒果核最大给药量，灌胃前禁食12 h, 但不禁水。对照组给予相同剂量的生理盐水。

　　2.5  观察实验前先将动物按性别分笼在实验室群养观察1 d。给药后当天密切观察12 h, 并详细记录观察结果,以后每天上午8～9时及下午15～16时各观察1 h, 并记录观察结果, 共连续观察14 d。对观察其中死亡的动物立即进行尸体解剖, 对尸检中发现异常者, 进行病理切片检查。

　　3  结果

　　3.1  最低抑菌浓度芒果核提取物对临床常见肠道致病菌的MIC见表1。可见该提取物对临床常见3种标准及耐药肠道致病菌有较明显的体外抑制作用，其中对志贺痢疾杆菌有较强的抑菌作用，MIC为7.8 mg/ml。表1  芒果核提取物体外最低抑菌浓度测定（略）　

　

　　3.2  抑菌实验芒果核提取物对临床常见肠道致病菌的抑菌圈直径见表2。表2  芒果核提体外抑菌圈直径测定（略）

　

　　3.3  急性毒性实验实验中，小鼠灌服1 d药物，观察两周，两组均未见动物任何异常反应, 各组动物试验组体重增长差异无异常变化，芒果核组和空白对照组动物无异常差别，灌药后14 d，处死小鼠，解剖，肉眼观察及病理组织学检查心、肝、脾、肺、肾、脑、小肠，均未发现异常。实验结果表明，小鼠24 h内共灌胃给予芒果核40 g生药/kg，即最大耐受量达40 g生药/kg。

    芒果核为漆树科植物芒果Mangifera indica L.的成熟干燥种子。目前国内外对芒果树的药用研究主要是集中在芒果叶提取天然多酚类化合物芒果苷（又名知母宁）上，包括在中枢神经系统、呼吸系统及心血管系统的作用，抗细菌、抗病毒、抗辐射、治疗肿瘤和糖尿病，保肝利胆、抗氧化及免疫调节等方面作用已做了部分研究，也对芒果树除了芒果核以外不同植株部位的芒果苷含量做了比较，但对芒果核的研究仅限在生药鉴定方面。我们通过芒果核提取物进行体外抑菌实验，发现该提取物对临床常见3种呼吸道及3种肠道致病菌有较明显的体外抑制作用［2］,说明该提取物有较广谱的抑菌作用，芒果核提取物为酸性(pH=4.44)。在1999年就曾有用于治疗肺部支原体感染取得良好效果的报告［3］。近期也有用于配伍后治疗儿童反复上呼吸道感染［4］及成人慢性胃炎［5］取得良好效果且均未见毒副作用的相关报告，说明其对呼吸道及胃肠道的感染有较好治疗作用，其服用对儿童及成人是安全的。本研究通过小鼠做规范的急性毒性实验更支持这点，我们也观察到部分临床治疗细菌性痢疾效果很好的病例，故本研究可为临床使用芒果核治疗常见肠道感染性疾病提供药效学及安全性的理论基础。

    芒果核提取物对耐药的志贺痢疾杆菌、福氏痢疾杆菌及大肠埃希菌也有较明显体外抑菌作用，这值得我们特别关注，说明该提取物不仅对常见肠道感染标准菌株有明显的体外抑菌作用，同时对其耐药菌株也有较明显的体外抑菌作用，但在人体内抑菌活性如何，可否部分替代耐药菌株感染的治疗尚需进一步研究，临床应用中观察到沸水冲泡1 h后饮用比水煎服效果更佳，故其作用机理是否仅仅因其中含有芒果苷具有的抗菌作用［6,7］，还是同时含有其他抑菌成分易挥发或高温分解尚待进一步分析、研究。

    芒果核按毒性分级标准, 属无毒类物, 可不进行蓄积毒性实验［8］。用药1  d，共两次,观察14 d， 小鼠血常规、肝肾功能化验结果未见显著差异, 7种脏器做病理解剖学肉眼及病理组织学检查均未见病理学改变, 提示芒果核具有良好的安全性。芒果核是被大量丢弃的废物，资源相当丰富，价格低廉，值得我们作进一步的深入研究。

 

作者：莫武桂, 刘华钢， 郑陈光， 黄维真， 贝为武， 佘尚扬， 韦蓉   《时珍国医国药》

作者单位：广西壮族自治区妇幼保健院， 广西医科大学，

 

  　　［1］陈 奇.中药药理研究方法学，第1版［M］.北京:人民卫生出版社, 1994：112.

　　［2］莫武桂，黄维真，贝为武.芒果核提取物体外抑菌作用的研究［J］.第四军医大学学报，2008，29（5）：417.

　　［3］何灿森. 芒果核汤治疗支原体肺炎40例［J］.中国民间疗法，1999，7（5）：34.

　　［4］段 娟,李宜瑞.复感宁方防治广州地区小儿反复呼吸道感染的临床研究［J］.广州中医药大学学报，2007，24（1）：25.

　　［5］张学斌,刘丰,余绍源，等.益胃饮治疗慢性胃炎(胃阴不足及气阴不足证)60例疗效观察［J］.新中医，2006，38（1）：38.

　　［6］Bairy I, Reeja S, Siddharth,et al. Evaluation of antibacterial activity of Mangifera indica on anaerobic dental microglora based on in vivo studies［J］.Indian J Pathol Microbiol. 2002 ，45(3):307.

　　［7］刘雪萍，蒋伟哲，黄兴振，等.芒果叶提取物体外抗菌作用研究［J］.中国药业，2007， 16 （ 9）：12.

　　［8］袁伯俊, 王治乔.新药临床前安全性评价与实验,第1版［M］.北京:军事医学科学出版社,1997:29.