复方羊角片微生物限度检查法方法学验证试验研究

【摘要】  方针：建树复方羊角片微生物限度搜检体例。体例：接纳低速离心沉淀集菌与造就基稀释联用法、造就基稀释法、通例法。功效：稀释剂斗劲组和试验组的菌接纳率均年夜于80%：阴性斗劲组未检出阴性斗劲菌，试验组检出阳性试验菌。结论：可以用该微生物限度搜检法进行复方羊角片的搜检。

【关头词】  复方羊角片；低速离心沉淀集菌法；造就基稀释法

Verification Test on the Technology of Microbial Limit Test　for Compound Yangjiao Tablets

　　Li Yeifeng，et al

　　Heilongjiang Renhetang Pharmaceutical Co.，Ltd(157011)

　　Abstract：Objective：To establish microbial limit test method for Compound Yangjiao Tablets.Methods：Verification test was carries out by integrated twomethods，collecting bacteria with low-speed centrifugation and nutrient medium dilution method：nutrient medium dilution method：common method.Results：The recovery rates of thinner control group and trial group are all more than 80%：The negative control group does not pick out negative bacteria control，trial group checks up positive bacteria.Conclusion：The microbial limit test method can be used dy  Compound Yangjiao Tablets.   

　　Key words：Compound Yangjiao Tablets；the method of collecting bacteria with low-speed centrifugation；Nutrent medium dilution method

　　复方羊角片系由羊角、川芎、白芷、制川乌等药材制成的复方制剂，为偏头痛，血管性头痛，弥留性头痛，神经性头痛的常用药。主要身分川芎、白芷都有抑菌浸染，按通例体例测定其微生物限度无法确保功效的切确性，体例验证是保证功效切确的独一路子。

　　1  工具

　　1.1  仪器   

　　电热恒温干燥箱、电热恒温造就箱、高压蒸汽灭菌锅、低速自动平衡离心计心情、净化事情台等。

　　1.2  样品    　　

　　复方羊角片（黑龙江仁合堂药业有限责任公司，批号：20090301）。

　　1.3  造就基   

　　营养琼脂造就基、玫瑰红钠琼脂造就基、胆盐乳糖造就基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸（MUG）造就基、改良马丁造就基、曙红亚甲蓝琼脂（EMB）造就基，均购自中国药品生物制品检定所。造就基的制备按干燥造就基瓶签标示体例配制及灭菌。

　　1.4  稀释剂   

　　pH7.0无菌氯化钠-卵白胨缓冲液、0.9%氯化钠溶液。按中国药典2005年版一部附录体例配制及灭菌。

　　1.5  菌种   

　　金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、年夜肠埃希菌，白色念珠菌、黑曲霉菌均泉源于中国药品生物制品检定所。   

　　2  体例

　　2.1  菌液制备  分袂接种年夜肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的奇异造就物至营养肉汤造就基中，于32℃造就24h；接种白色念珠菌的的奇异造就物至改良马丁造就基中，于25℃造就48h，分袂取各菌种造就液1ml用0.9%无菌氯化钠溶液稀释，分袂取1ml 10-5、10-6和10-7稀释液至平皿中，倾泻营养琼脂造就基，造就48h，计数；接种黑曲霉菌的奇异斜面造就物，用0.9%无菌氯化钠溶液5ml将孢子洗脱，罗致此溶液1ml用0.9%无菌氯化钠溶液稀释，分袂取1ml 10-5、10-6和10-7稀释液至平皿中，倾泻玫瑰红钠琼脂造就基，造就48h，计数。拔取菌落数为50～100cfu的响应稀释级的造就液，保留备用。

　　2.2  供试液制备  称取样品10 g，研细，加pH7.0无菌氯化钠-卵白胨缓冲液至100 ml，制成 1∶10供试液。

　　2.3  细菌总数、霉菌及酵母菌总数搜检体例的验证

　　2.3.1  试验组  ①细菌：取划定量供试液，离心（500r/min）5min，取全数上清液加pH7.0无菌氯化钠-卵白胨缓冲液补至原量，再离心（3000r/min）20min，取舍上清液，留底部菌液约2ml，加pH7.0无菌氯化钠-卵白胨缓冲液补至原量混匀，根据2005版药典微生物限度造就基稀释法（0.2ml/皿）磨练；②霉菌及酵母菌：取划定量供试液，根据2005版药典微生物限度造就基稀释法（0.2ml/皿）磨练。

　　2.3.2  菌液组  测定所加的试验菌数。除不加供试液外，操纵同试验组。

　　2.3.3  供试品斗劲组测定供试品本底菌数。除不加菌液外，操纵同试验组。

　　2.3.4  稀释液斗劲组测定稀释液是否干扰微生物发展。取稀释液 l ml，别的同试验组。   

　　三次试验功效见表1、表2、表3。   

　　第一次试验功效：   

表1  细菌、霉菌及酵母菌数验证试验（略）

　　第二次试验功效：   

　　表2  细菌、霉菌及酵母菌数验证试验（略）

　　第三次试验功效：   

　　表3  细菌、霉菌及酵母菌数验证试验（略）

　　2.4  节制菌搜检体例的验证

　　2.4.1  试验组  取1∶10供试液10ml，加胆盐乳糖造就基100ml，再加阳性斗劲菌年夜肠埃希菌菌液（浓度同细菌、霉菌及酵母菌数验证）1ml，摇匀，置35～37℃造就24h后作 MUG试验及靛基质试验。操纵MUG造就和靛基质试验对年夜肠埃希菌进行造就检测。年夜肠埃希菌浓度同细菌、霉菌及酵母菌数验证。

　　2.4.2  阴性菌斗劲组  体例同试验组，金黄色葡萄球菌菌液（浓度同细菌、霉菌及酵母菌数验证）l ml庖代年夜肠埃希菌。同时作稀释液和造就基阴性斗劲。   

　　三次功效均齐截，见表4。   

　　表4  节制菌验证试验功效（略）

　　注：如MUG阳性、靛基质阳性，果断试验品检出年夜肠埃希菌；如MUG阴性、靛基质阴性，果断试验品未检出年夜肠埃希菌。   

　　3  功效

　　3.1  细菌总数、霉菌及酵母菌总数搜检体例验证5种菌株的接纳率均高于80%（表1、表2、表3），合适验证划定。稀释剂斗劲组的接纳率（%）=（稀释剂斗劲组平均菌落数/菌液组平均菌落数）×100%；试验组的接纳率（%）=［（试验组平均菌落数-供试品斗劲组平均菌落数）/菌液组平均菌落数］×100%。

　　3.2  节制菌搜检体例验证试验组阳性菌斗劲检出年夜肠埃希菌，阴性菌斗劲未检出年夜肠埃希菌（表4），说明本法可检出年夜肠埃希菌，具有专属性，合适验证划定。   

　　4  谈判

　　4.1  在建树测定体例时应详尽某些供试品具有抑菌活性，概略影响磨练功效的切确性，必需对供试品的抑菌活性及测定体例的靠得住性进行验证。

4.2  若EMB平板上发展的菌落与年夜肠埃希菌形态疑似，应挑取可疑菌落进行涣散、纯化、染色镜检和IMViC试验，确认年夜肠埃希菌。 

来源：《黑龙江医药》 

【参考文献】

  　　［1］ 中华人平易近共和国国家药典委员会.中国药典［S］.一部.北京：化学财产出版社，2005.附录73.

　　［2］ 黄小静.4种丸剂微生物限度搜检法体例验证［J］.海峡药学，2008，20（6）：75-77.

［3］ 宋勤，袁林娜，刘应旭.口服头孢拉定制剂微生物搜检法研究试验［J］.药物剖析杂志，2005，25（6）：689-691.

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