用组织培养法繁殖葡萄, 可达到优良萄萄快速育苗的目的, 以满足生产需要。同时也是工厂 化育苗和脱毒苗木快速繁殖的重要手段, 并能常年进行, 缩短了苗木繁殖周期,加快新品种的推广应用。
1 试管苗的初代培养
植物组织培养是无菌地培养植物的技术, 因此, 离体进行葡萄试管繁殖, 脱除病毒,胚胎花药和子房培养, 细胞和原生质培养, 离体保存等, 都必须使用无菌材料。葡萄组织初代 培养, 其繁殖材料多取自大田, 常带有大量细菌和霉菌,必须进行消毒方可获得无菌材料 。材料采集在组培前3d的晴天上午, 取带腋芽的葡萄半木质嫩茎, 剪取后立即拿入室内 , 先用自来水反复冲洗, 除去病虫枝、伤残枝, 减除大叶片, 装入广口瓶进行消毒。用无菌 操作技术, 倒入无菌水浸泡和冲洗; 倒去无菌水, 加入0.1%升汞(内加2%的95%酒精)浸泡材 料, 并剧烈摇动6～9min, 剪去受伤端面, 剪成单芽茎段, 接入培养基中。每瓶一段, 正插入内。标号后放到培养室培养, 一周后检查, 如未污染, 基本上不会再污染。通过对美人指、早红提等品种的生产, 取得了90%以上无污染成苗率。
2 试管苗的继代繁殖
对初代培养合格或引进的试管苗, 一般采用MS、B5、GS等培养基, 具体做法如下:
(1)穿好工作服, 戴上工作帽, 用洁净的水洗手, 再用75%的酒精棉球擦手消毒。
(2)取无菌原种苗瓶放于超净台, 用75%酒精棉球仔细擦试包头纸及苗瓶外体,并解开包头纸捆扎线绳。
(3)将弯剪刀、枪状镊子浸入75%酒精中, 用时取出在火焰上浇15～30s, 晾凉备用。
(4)将无菌原种苗瓶的包头纸连同棉塞一同拔下, 放在超净台一旁, 瓶口在火焰上烧5～10s , 用冷却的剪刀将瓶内小苗剪成单芽茎段, 下端稍长, 上端较短, 但剪口距芽至少0.5cm 以上。母株基部要留一个芽, 使其再发。剪下的单芽茎段,用无菌镊子逐个夹出, 放入新的 培养基瓶内, 并使叶子和芽露出培养基。150ml三角瓶插5个左右茎段, 插完后将瓶口在火 焰上转动烧一圈, 旋好棉塞和包上包头纸, 用绳扎好, 注明品种名称和时间等。如此反复的 接好所有苗子,并放到培养室。一般每月转接增殖3次。
3 试管苗的培养
将接种后的培养苗瓶, 放在培养室的架上, 培养室昼夜温度保持在22～28℃, 新转接的 苗瓶应放在培养架上层, 上层温度略高易于生根。湿度以70%为宜,光照2000～3000lx的日光灯。
4 移栽
移栽多在冬季或春季进行。
(1) 光培炼苗。培养室培养的试管苗生长达瓶口, 有3～4枚正常叶片时, 根系生长良 好, 连 同培养瓶转入温室或大棚内, 逐步去掉瓶塞, 放在干净的温室中, 2～4万lx的自然光下 炼 苗5～7 d, 当瓶口长出油亮的叶片, 幼茎变淡红色时即可出瓶。
(2)沙培炼苗。最好备有下铺电热线并能调节温度的沙床, 使床温维持在25℃左右。以0.6 c m间距布置电热线, 其上铺垫2 cm的土, 压平, 再铺8～10 cm的干净细河沙, 湿度在12%左 右 , 即手捏成团落地能散。
清晨或傍晚, 将培养瓶内的幼苗轻轻倒出, 洗掉根上附着的培养基, 栽入沙床, 株 距3～4 cm, 行距8～10 cm, 每平方米大约栽400～500株苗。栽入沙床后, 盖好小拱棚, 最初3 d, 棚 内温度保持在25℃左右, 最高不超过30℃, 最低不低于20℃。相对湿度保持在80%～95%; 光 照0.7～10万lx。6～7 d, 拆除临时小拱棚。
(3)温室营养袋炼苗。经沙培后的合格苗, 小心挖出, 在空气湿度不低于70%, 温度20～25℃ , 无直射光下, 栽入肥土: 沙: 腐熟有机肥为1∶1∶0.2的营养钵中。最初几天对温、光、湿的管理与沙培苗相同。
(4)大田苗圃移栽。选疏松肥沃排灌水方便、距温室较近且日照良好的地块作苗 圃, 将营养 袋苗移栽苗圃即可。小苗有3个月的生长期, 并及时打掉副梢, 促进枝芽老化成熟, 达到合格优质苗。
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