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中华人民共和国轻工行业标准——皱纹纸(节选)之二


录入时间:2011-3-24 10:23:54 来源:豆丁网

A2 产品采集与样品处理
  于同一批号的三个大包装中至少随机抽取15包小包装样品,三分之一用于测试,三分之一留样,三分之一必要时复测用。样品最小包装不应有破裂,检验前不得启开。
  在100级净化条件下或超净工作台中用无菌方法至少打开5个小包装,从中随机准确称取10 g样品,剪碎后加入到100 mL灭菌生理盐水中,振打80次或用混匀器充分混匀。每一种样品共取30 g,分别接种3管生理盐水样液。
A3 细菌菌落总数测试方法
A3.1操作步骤
待上述样液自然沉降后取上清液作菌落计数。共接种6个平皿,每个平皿中加入1 mL样液,然后用冷却至45℃左右的熔化的营养琼脂15 mL倒入平皿内,混合均匀。待琼脂凝固后翻转平皿置37℃ 培养24 h后,计算平板上的菌落数。当平板上菌落数超过300时应稀释后再计数。
A3.2 菌落计数及结果报告
菌落呈片状生长的平板不宜采用;计数符合要求的平板上的菌落,按式(A1)计算结果:
  每克样品细菌菌落总数(cfu/g)=平板上菌落平均数×10 (A1)
  所得结果超过标准值的10%,必须重复检测一次,以两次结果的平均数为最终结果。
  当菌落数在100以内时,按实有数报告,大于100时采用二位有效数字。
A4 大肠菌群检测方法
A4.1 操作步骤
取样液的上清液接种乳糖胆盐发酵管。共接种3管,每管接种1 mL样液,置37℃ 培养24 h,如不产酸也不产气,则报告为大肠菌群阴性。
  如产酸产气,则划线接种伊红美蓝琼脂平板,置37℃ 培养18~24 h,观察平板上菌落形态。典型的大肠菌落为黑紫色或红紫色,圆形,边缘整齐,表面光滑湿润,常具有金属光泽,也有的呈紫黑色,不带或略带金属光泽,或粉紫色,中心较深的菌落。
  挑取可疑大肠菌落1~2个进行革兰氏染色镜检,同时接种乳糖发酵管于37℃培养24 h,观察产气情况。
A4.2 结果报告
凡乳糖胆盐发酵管产酸产气,乳糖发酵管产气,在伊红美蓝平板上有典型大肠菌落,革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌,可报告被检样品检出大肠菌群。
A5 金黄色葡萄球菌检测方法
A5.1 操作步骤
取样液5 mL,加入到50 mL SCDLP培养液中,充分混匀,置37℃培养24 h。
  自上述增菌液中取1~2接种环,划线接种在血琼脂培养基上,置37℃培养24~48 h。在血琼脂平板上该菌菌落呈金黄色,大而突起,圆形,不透明,表面光滑,周围有溶血圈。
  挑取典型菌落,涂片作革兰氏染色镜检。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌,排列成葡萄状,无芽胞与荚膜。镜检符合上述情况,应进行下列试验:
  甘露醇发酵试验:取上述菌落接种到甘露醇培养液中,置37℃培养24 h,发酵甘露醇产酸者为阳性。
  血浆凝固酶试验
玻片法:取清洁干燥载玻片,一端滴加一滴生理盐水,另一端滴加一滴兔血浆,挑取菌落分别与生理盐水和血浆混合,5 min如血浆内出现团块或颗粒状凝块,而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固则为阳性,如两者均无凝固则为阴性。凡盐水滴与血浆滴均有凝固现象,再进行试管凝固酶试验。
试管法:吸取1∶4新鲜血浆0.5 mL,放灭菌小试管中,加入等量待检菌24 h肉汤培养物0.5 mL。混匀,放37℃温箱或水浴中,每半小时观察一次,24 h之内呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物各0.5 mL作阳性与阴性对照。
A5.2 结果报告:凡在琼脂平板上有可疑菌落生长,镜检为革兰氏阳性葡萄球菌,并能发酵甘露醇产酸,血浆凝固酶试验阳性者,可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。
A6 溶血性链球菌检测方法
A6.1 操作步骤
取样液5 mL加入到50 mL匹克氏肉汤(A1.9)中,37℃培养24 h。
  将培养物划线接种血琼脂平板,37℃培养24 h观察菌落特征。溶血性链球菌在血平板上为灰白色,半透明或不透明,针尖状突起,表面光滑,边缘整齐,周围有无色透明溶血圈。
  挑取典型菌落作涂片革兰氏染色镜检,应为革兰氏阳性,呈链球状排列的球菌。镜检符合上述情况,应进行下列试验:
链激酶试验:吸取草酸钾血浆0.2 mL(0.01 g草酸钾加5 mL兔血浆混匀,经离心沉淀,吸取上清液),加入0.8 mL灭菌生理盐水,混匀后再加入待检菌24 h肉汤培养物0.5 mL和0.25%氯化钙0.25 mL,混匀,放37℃水浴中,2 min观察一次(一般10 min内可凝固),待血浆凝固后继续观察并记录溶化时间。如2 h内不溶化,继续放置24 h后观察,如凝块全部溶化为阳性,24 h仍不溶化为阴性。
  杆菌肽敏感试验:将被检菌菌液涂于血平板上,用灭菌镊子取每片含0.04单位杆菌肽的纸片放在平板表面上,同时以已知阳性菌株作对照,在37℃下放置18~24 h,有抑菌带者为阳性。
A6.2 结果报告:镜检革兰氏阳性链状排列球菌,血平板上呈现溶血圈,链激酶和杆菌肽试验阳性,可报告被检样品检出溶血性链球菌。
 

 

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