淋病奈瑟菌改良选择性培养基的研制和应用

淋病是我国发病率最高的性病，已成为重大公共卫生问题。防止淋病流行的 关键是及时诊断和治疗。培养法一直是诊断淋病奈瑟菌感染的黄金标准，至今仍是用于常规 测定的唯一方法。淋病奈瑟菌(NG)分离培养时对培养基的营养要求非常高，泌尿道样品中有 多种杂菌，杂菌在富有营养的培养基上旺盛的生长，严重影响了NG培养法的阳性率。近年世 界 卫生组织(WHO)推荐敏感性和选择性更好的改良NG选择性培养基(MTM)来培养分离淋病奈瑟菌 。我们根据美国国立临床实验室标准化委员会(NCCLS)文件［1］和有关资料［ 2］，研制MTM培养基，并在临床实验室的应用中得到良好评估。

 

材料和方法

 

　　一、　试剂

　　1.对照MTM培养基　OXOID公司产品，按说明书配制。

　　2.NG 基础培养基 干粉　购买上海伊华医学科技有限公司NG干粉，加入适量无水磷酸氢二钠，研磨混 匀后分装 ，每瓶15g，使MTM最终pH为7.2。

　　3.杂菌抑制剂　三甲氧苄二氨嘧啶、多粘菌素、制霉 菌素、万古霉素均购自Sigma。无菌操作溶解后分装于2 ml 安瓿，内含三甲氧苄二氨嘧啶 1 .5 mg、多粘菌素B 12500 IU、制霉菌素3750 IU、万古霉素0.9 mg，冷冻 干燥。每300 ml NG基础培养基加入一支安瓿复溶后的抑菌剂。

　　4.营养添加剂　胱氨酸、鸟嘌呤、维生素B 1、PABP、维生素B12、辅羧酶、辅酶Ⅰ(NAD)、腺嘌呤、谷氨酰胺、葡萄糖、硝 酸铁 、半胱氨酸为国产试剂，混合溶解后过滤除菌，分装于2 ml 安瓿，无菌试验合格后冷冻干 燥。每300 ml NG基础加入一支安瓿复溶后的营养添加剂。

　　5.菌种来源　淋病奈瑟菌ATCC 4 3070、大肠杆菌ATCC 25922、铜绿假单胞菌ATCC 27853、金黄色葡萄球菌ATCC 25923；脑膜 炎奈瑟菌、卡他莫拉菌、藤黄微球菌、表皮葡萄球菌、A 群链球菌、草绿色链球菌、肺炎链 球菌、伤寒沙门菌、肺炎克雷伯菌、粘质沙雷菌、奇异变形杆菌、产气肠杆菌、异型枸橼酸 杆菌、温和气单胞菌、洛菲不动杆菌、枯草杆菌、白喉棒状杆菌、白色念珠菌均为WHO微生 物质量控制菌株。

　　二、　MTM配制方法 　小瓶中NG干粉倒入300 ml蒸馏水中， 在三角烧瓶内混合后放置10 min，高压灭菌115℃ 15 min。冷却至56℃左右加15～30 ml无菌脱纤维羊血及营养添加剂和杂菌抑制剂各一安瓿，混匀后倾注平板。

　　三、　培养条件 　37℃，5% CO2环境下培养24～48 h。环境应潮湿，无湿度控制的老式CO2 孵育箱 ，应在箱底放一水盘。烛缸中的介质水气的蒸发可提供良好的湿度，但不能用彩烛。

 

结　　果

 

　　一、　NCCLS和WHO标准菌株的培养结果 　按培养基鉴定的国际规定［ 3］，所有待测菌株均分别悬浮于胰胨大豆肉汤(TSB)使成为0.5麦氏单位悬液，将它和10 0倍稀释后的此悬液分别接种二种MTM培养基，培养24 h。淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、卡他 莫拉菌在本文MTM和OXOID公司的MTM上均有良好生长，菌落大小、形态与OXOID公司的MTM上 的相同。除上述三种细菌外，只有解乳糖奈瑟菌也可能在MTM上生长(由于缺乏此标准菌株， 本文未测试该菌)［2］。藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、A群链球菌 、草绿色链球菌、肺炎链球菌、大肠杆菌、伤寒沙门菌、肺炎克雷伯菌、粘质沙雷菌、奇异 变形杆菌、产气肠杆菌、异型枸橼酸杆菌、铜绿假单胞菌、温和气单胞菌、洛菲不动杆菌、 枯草杆菌、白喉棒状杆菌、白色念珠菌在本MTM培养基上二种菌浓度均受完全抑制，情况和O XOID公司的MTM上呈现的抑制结果相同。

　　以上结果完全符合NCCLS对MTM的质量控制要求： 淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌生长；奇异变形杆菌、大肠杆菌、干燥奈瑟菌、白色念珠菌、表 皮葡萄球菌被抑制或部分抑制［3］。

　　二、　与OXOID公司的MTM临床应用 比较 　上海市三家医院临床实验室同时使用二种MTM培养187例女子宫颈内或男子泌尿道处采 集的样品，二者结果完全相同，有23例培养出淋病奈瑟菌，164例呈阴性结果。

 

讨　　论

 

　　三甲氧苄二氨嘧啶能抑制变形杆菌属细菌的生长，尤其对其蔓延性生长有极理想的抑制作 用。从抑菌剂中抽去该试剂，对变形杆菌的抑制作用立刻消失，它的迁移性生长完全掩盖了 淋病奈瑟菌的生长。尽管三甲氧苄二氨嘧啶价格昂贵，仅此一项成本就接近于MTM其他所有 材料的价格，但还是不应该从抑菌剂中省略，要检查所用的MTM中是否有该试剂存在，只要 用奇异变形杆菌鉴定即可。

　　本文研制的MTM和国际著名的OXOID公司原装MTM检出淋病奈瑟 菌的结果完全符合，包装量小，配制方便，适合基层单位使用。

 

作者：葛平，徐蓉，吕绳凯《上海医学检验杂志》

 

参考文献

 

［1］NCCLS:January 1999 M100-S9 ［S］. P 88.

［2］吕绳凯，储迅涛．淋病的实验室诊断［J］. 中华医学检验杂志，1998 ；21(3)∶185.

［3］吕绳凯，潘云华，马子行．NCCLS的商品微生物培养基的质量保证［J］. 上海医学检验杂志，1998；13(2)∶117.