微生物实验中常用药品试剂配制——染色剂

（六）染色剂

 

 

配方一 齐氏（Ziehl）石炭酸品红染液

甲液 取石炭酸5克，溶解在95毫升蒸馏水中。

乙液 取0.3克碱性品红，放入研钵中研磨，逐渐加入10毫升95%酒精，继续淹没，使它溶解。

将甲液和乙液混合后，摇匀，过滤，装瓶，备用。

 

配方二 罗氏（Loeffler's）美蓝染液

甲液 取5克美蓝，溶于100毫升95%酒精中，制成美蓝-酒精饱和液。

乙液 取氢氧化钾0.01克（或1%氢氧化钾溶液1毫升），溶液也可用于放线菌染色，0.1%浓度可用于酵母菌染色。

 

配方三 革兰氏（Gram's）染液

用此液染色因先用甲液染色，再加乙液固定，用丙液处理，最后用丁液复染。四种液体的配方如下：

甲液（结晶紫液）

（1）结晶紫 2克 95%酒精 20毫升

（2）草酸铵 0.8克 蒸馏水 80毫升

使用钱江（1）、（2）液相混，静置48小时后使用。

乙液(碘液)

碘 1克 碘化钾 2克 蒸馏水 300毫升

将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘，待碘全部溶解后，加水稀释至300毫升。

丙液 95%酒精溶液

丁液（番红花红液）

2.5%番红花红酒精溶液 10毫升 蒸馏水 100毫升

 

 

配方一 芽孢染液 用此配方染色是用甲液染色后，用乙液复染。

甲液 取5克孔雀绿，加入少量蒸馏水，使它溶解后，用蒸馏水稀释到100毫升，即成孔雀绿染液。

乙液 取番红花红0.5克，加入少量蒸馏水，使它溶解后，用蒸馏水稀释到100毫升，集成番红花红复染液。

 

配方二 荚膜染液 此配方先用甲液染色，后用乙液复染。

甲液 取结晶紫0.1克，溶于少量蒸馏水后，加水稀释到100毫升，再加入0.25毫升冰醋酸一结晶紫染液。

乙液 取硫酸铜31.3克，溶于少量蒸馏水后，加水稀释到100毫升，即成20%硫酸铜脱色剂。

 

配方三 鞭毛染液

甲液

饱和明矾溶液 2毫升 5%石炭酸溶液 5毫升

20%丹宁酸溶液 2毫升

乙液

碱性品红 11克 95%酒精 100毫升

使用前取甲液9毫升和乙液1毫升相混，过滤即可。

 

 

配方一 纤维素细胞壁染液（Ⅰ）

取固绿0.1克，溶于100毫升95%酒精中，即成0.1%固绿-酒精溶液。

该液能染色纤维素细胞壁，还用于动植物中作浆质染色剂。

 

配方二 纤维素细胞壁染液（Ⅱ）

氯化锌 20克 碘化钾 6.5克

碘 1.5克 蒸馏水加至100毫升

先把氯化锌溶于少量蒸馏水中，再加入6.5克碘化钾，在碘完全溶解后，用蒸馏水稀释到100毫升，即成碘-氯化锌溶液。

该染液能把细胞壁染成紫色，胞质染成淡黄色，胞核染成棕色。

 

配方三 纤维素细胞壁染液（Ⅲ）

甲液 取1克碘和1.5克碘化钾，溶于100毫升蒸馏水中，即成1%碘液。

乙液 取7份硫酸和3份蒸馏水相混，即成66.5%硫酸溶液。

染色时，在材料上滴加甲液，再加一滴乙液，纤维素细胞壁就染成黄色。

 

配方四 木质化细胞壁染液（Ⅰ）

硫酸化苯胺（或盐酸话本安） 1份

蒸馏水 70份 95%酒精 30份

硫酸 30份

将上述各组分相混，将细胞材料放入混合液里染色，可是木质化细胞壁呈鲜黄或姜黄色。

 

配方五 木质化细胞壁染液（Ⅱ）

取间苯三酚4～5克，溶于100毫升95%酒精中，即成间苯三酚-酒精液。

先在材料上滴上1滴浓盐酸，然后滴上间苯三酚-酒精液1滴，木质化的细胞壁就染上樱红或紫红色。

 

配方六 木质化细胞壁染液（Ⅲ）

取1克番红，溶于99毫升蒸馏水中，即成1%番红溶液。

 

 

配方一 伊红染液

伊红染液一般配用水溶液和酒精溶液两种。

（1）取1克伊红，溶于99毫升蒸馏水中，即成1%伊红水溶液（市售红墨水内含伊红成分，可以用红墨水稀释液来代替本溶液）。

（2）取1克伊红，溶于99毫升70%酒精中，即成1%伊红-酒精溶液。

 

配方二 甲基蓝染液

取1克甲基蓝，溶于29毫升70%酒精中，加入70毫升蒸馏水，即成1%甲基蓝染液。

 

配方三 亮绿染液

取0.5克亮绿，溶解在100毫升蒸馏水中，即成0.5%亮绿溶液。

 

 

配方一 甲基绿染液

取1克甲基绿，溶于99毫升蒸馏水中，加入1毫升冰醋酸。本染液能染细胞核，还用来染木质化细胞壁。

 

配方二 龙胆紫染液

取1克龙胆紫，溶于少量2%醋酸溶液中，加2%醋酸溶液，直到溶液不呈深紫色止。

 

配方三 美蓝（亚甲基蓝）染液

取0.5克美蓝，溶于30毫升95%酒精中，加100毫升0.01%氢氧化钾溶液，保存在棕色瓶内 。

此溶液能染细胞核，还用来染细菌、血和神经组织等。

 

配方四 硼砂-洋红染液

取4克硼砂，溶于96毫升蒸馏水中。再加入2克洋红，加热溶解后煮沸30分钟，静置3日，用100毫升70%酒精冲淡，放置24小时后过滤。

此染液能染细胞核，还用来染糊粉粒和一般动物、植物的整体染色，如水螅、血吸虫等整体标本。

 

配方五 德氏（Delafield's）苏木精染液

甲液 取1苏木精，溶于6毫升无水酒精中，即成苏木精-酒精溶液。

乙液 取10克铵矾溶于90毫升蒸馏水中，即成10%铵矾水溶液。

取甲液逐滴加入到乙液中，用纸遮盖，放在阳光明亮处，使它充分氧化。3～4天后将溶液过滤，在滤液中加入25毫升甘油和25毫升甲醇，保存在密闭玻璃瓶内。静置1～2个月，待该液颜色变深时过滤，可长久保存。

本染液是染色体的优良染色剂，除能染细胞核外，还用来染纤维素、细胞壁和动植物组织。

 

配方六 席夫（Schiff's）试剂

称取0.5克碱性品红，加到100毫升煮沸的蒸馏水中，再微微加热5分钟，不断搅拌，使它溶解。在溶液冷却到50摄氏度时过滤，滤液中加入10毫升1N盐酸。再冷却到25摄氏度时加入0.5克偏重亚硫酸钠或无水亚硫酸氢钠。把溶液装入棕色试剂瓶内，摇荡后，塞紧瓶塞，放在黑暗中24小时。在溶液颜色退到淡黄色时，加入0.5克活性炭，用力摇荡1分钟，过滤后把滤液贮在棕色试剂瓶内，塞紧瓶塞，滤液应该是无色的。在使用时勿让溶液长时间暴露在空气中和见光（瓶外用黑纸或暗盒遮光）。如溶液变成红色，即失去染色能力。

碱性品红是较强的核染色剂，在孚尔根氏（Feulgen's）反应中作为组织化学试剂，以检查DNA。

 

 

配方一 醋酸-洋红染液

取45毫升冰醋酸，加蒸馏水55毫升，煮沸后徐徐加入洋红1克，搅拌均匀后加入1颗铁锈钉，煮沸10分钟，冷却后过滤，贮存在棕色瓶内。

 

配方二 醋酸-地衣红染液

取45毫升醋酸，跟55毫升蒸馏水相混，加热，徐徐加入地衣红粉末1～2克，搅拌溶解后，缓缓煮沸2小时。冷却后过滤，贮存在棕色瓶里。

 

配方三 龙胆紫染液

取1克龙胆紫，用少量蒸馏水溶解后，加蒸馏水，稀释到100毫升，保存在棕色瓶内。

 

配方四 甲苯胺蓝染液

取0.5克甲苯胺蓝，溶解在100毫升蒸馏水中，即成0.5%甲苯胺蓝水溶液。

 

 

配方一 詹钠斯绿B(Janu's green B)酒精饱和溶液

取125毫升詹钠斯绿B，加入到62.5毫升无水酒精中，搅拌，即成烟鲁绿B酒精饱和染液。

（1）取詹钠斯绿酒精饱和染液按1：30000比例加蒸馏水稀释，用来染原生动物线粒体。

(2)取詹钠斯绿酒精饱和液，按1：10000比例加蒸馏水稀释，用来染新鲜蛙血线粒体。

 

配方二 詹钠斯绿B中性红染液

先配制詹钠斯绿B和中性红酒精饱和液。詹钠斯绿酒精饱和液见配方一。中性红酒精饱和液配制方法：取125毫升中性红，加入到50毫升无水酒精中，搅拌。

在10毫升生理盐水（两栖类生理盐水浓度为0.65%；哺乳类生理盐水浓度为0.9%）中，加入詹钠斯绿B酒精饱和液0.7～1毫升，中性红酒精饱和液2毫升，混合。

詹钠斯绿B稀释液是活体染液。

 

 

取0.1克苏丹Ⅲ，溶于20毫升95%酒精中，即成0.5%苏丹Ⅲ染液。

这染液能染脂肪，还能染木栓、角质层。

 

 

配方一 瑞氏（Wright's）染液

取瑞氏染料粉末0.1克和甲醇60毫升。把染料放在研钵内，加少量甲醇研磨，使染料溶解，然后把溶解的染料倒入干净的棕色玻璃瓶。并用完甲醇为止。配制好的染液在室温中保存，即可使用。新鲜配制的染液偏碱性，放置后呈酸性，染液贮存愈久染色愈好。这染液的适宜pH值是6.4～6.8。因此，染色时加入缓冲液，可维持一定的酸碱度，使染色效果更好。

这种染液除能染血液，还能染疟原虫。

 

瑞氏染料可以自制。在100毫升0.5%碳酸氢钠水溶液里加入1克美蓝，溶解后放在锅内，蒸上1小时，取出冷却后过滤。在滤液里加入0.1%伊红水溶液500毫升，随加、随搅拌，使混合液呈紫色。静置一夜后，用滤纸过滤。滤纸上的沉淀物，在室内风干或放在干燥箱内，充分干燥后研磨成粉末，即成瑞氏染料。

 

配方二 甲基紫染液

取甲基紫0.5克，加到100毫升生理盐水中，溶解后加入冰醋酸0.02毫升。

 

 

取铵明矾（硫酸铝铵）5克，溶于95毫升蒸馏水中，再加入0.5克洋红酸，加热溶解，冷却后过滤。在滤液中加入少量防腐剂，如麝香草酚、樟脑粉、水杨酸钠、苯酚（石炭酸）等，以防生霉。

这种染液适合于染小型动物材料，如吸虫等寄生虫的整体，也能染高等植物的表皮和蕨类植物的原叶体。

 

 

配方一 中性红染液

先配成1%中性红水溶液（1克中性红溶于100毫升蒸馏水中）。取这种溶液1毫升，用0.6%生理盐水（或蒸馏水）稀释到50毫升，即成0.02%中性红水溶液，贮存在棕色瓶里，放在黑暗处。

本染液用来显示原生动物的食物泡以及动植物组织中活细胞的内含物等。

 

配方二 尼罗蓝（Nile Blue）染液

取0.1克尼罗蓝，溶解于1000～1500毫升蒸馏水中，即成尼罗蓝染液。

这种染液能把原生动物大核染成绿色，食物泡染成蓝色。

 

配方三 亚甲蓝染液

取0.1克亚甲蓝，溶解于1000毫升蒸馏水中，即成亚甲蓝染液。

这种染液用于原生动物的活体染色。

 

 

配方一 茜素红染液（Ⅰ）

取冰醋酸5毫升、甘油5毫升、1%水合氯醛60毫升混合。在这种混合液中方入少量茜素红，制成茜素红饱和溶液。

 

配方二 茜素红溶液（Ⅱ）

取1克茜素红，溶于100毫升95%酒精中，搅拌，然后跟900毫升1%氢氧化钾溶液相混，即成深紫色的茜素红染液。