微生物实验中常用药品试剂配制——固定液和保存液

 

用固定液固定动植物整体或它的一部分组织和气管等，能保存组织内细胞的形态、结构及其组成，尽量使它近于生活状态。固定液一般有防腐和保存的作用，分为单纯固定液和混合固定液。单纯固定液中最重要的有乙醇、福尔马林、醋酸、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、升汞等，前两种固定液是中学生物实验室常用的。单纯固定液的优点是简便，缺点是有一定的局限性，不易达到理想的固定要求。混合固定液有几种不同的药液按一定的比例混合而成，使各自的优缺点相互补充，成为较完美的固定液。这种固定液的制备虽比较麻烦，但是效果比较好。常用的混合固定液是醋酸-酒精混合液、福尔马林-醋酸-酒精液、包因氏固定液等。

 

常用的保存液大致跟固定液相同，主要是福尔马林、酒精、甘油以及由这些药物按比例配制成的各种混合液。有时按特殊保存的需要，再保存液中增加某些药品（如原生标本的保存液）。

 

 

福尔马林在固定组织标本时杀菌能力强，所以防腐性强，渗透力大，固定得快。永福尔马林固定精细的解剖标本时，要跟甘油、酒精、石炭酸等混合使用。

固定液常用的浓度是5～10%（根据材料的大小、性质和数量而定）。

保存液常用的浓度是5～10%。用福尔马林作保存液，效果好且价格低廉。

在配制福尔马林溶液（固定液或保存液）时，应将37～40%的甲醛作为整个溶质来配。例如配制5%福尔马林是取市售37～40%甲醛溶液5毫升跟95毫升蒸馏水混合。实际上甲醛含量只有1.9～2%，这样的配法已成为一般实验室常用的惯例。

 

注意事项：

（1）福尔马林业在长期贮存中会产生蚁酸，可适量的加入碳酸钙或碳酸镁等碱性物质进行中和。

（2）福尔马林业作为保存液会慢慢挥发而致使浓度降低，并且福尔马林液再保存中往往形成多聚甲醛，使浸液变浊，影响观察。所以，根据一定保存期的情况，可适当增加福尔马林液的浓度或更换新液，以防标本变坏。其中如有白色沉淀物，加热后可使它溶解。

（3）市售的福尔马林液常带有酸性，能腐蚀石灰质，因此，最好不用福尔马林液浸制有石灰质外壳的动物。

 

 

酒精也是常用的固定液，它有强烈的杀菌作用，对组织材料的渗透力较大，固定的快。但是，它的脱水作用较强，在高浓度的酒精中容易使材料显著硬化和收缩。一般用于固定浸制标本材料，分一级或二级固定，即70%或50%与70%的酒精。有些小型材料或精细的解剖材料，最好用二级或三级固定，即用50%、70%或50%、60%、70%的酒精，最后再进行保存。从经济效果来考虑，一般酒精应跟福尔马林液等固定液混合使用。

市售的工业用酒精浓度是95%左右，因此用时要重新配制。保存液的浓度通常是70%。

 

注意事项：

（1）在固定材料时要注意固定的效果，小型材料一般放在固定液中固定。大型材料必须先往体内注射一部分固定液，再放入固定液中，防止材料内部腐怀变质。用福尔马林液固定也是如此。

（2）高浓度的酒精有脱水、脱脂作用。含有多量脂肪或拟脂标本（如脑、脊髓）等都不宜用较高浓度的酒精作保存液。

（3）为了防止酒精使标本硬化，保存一些精细的材料或解剖标本时，因加入少量甘油，因为甘油具有润软组织的作用。

（4）忌跟铬酸、锇酸和中铬酸钾等氧化剂配合。

 

醋酸即乙酸，纯醋酸在低于16.7摄氏度时会凝成冰状固体，所以叫冰醋酸。醋酸能很快穿透组织，因为它不能沉淀细胞质中的蛋白质，组织不会硬化。一般常跟酒精、福尔马林、铬酸等容易引起组织变硬和收缩的液体混合，以起到相互抵消的作用。

醋酸固定液的常用浓度是0.3%～5%。

 

苦味酸是一种黄色结晶，能溶于水（溶解度是0.9～1.2%）、酒精（溶解度是4.9%）和苯（溶解度是10%）。苦味酸也能沉淀一切蛋白质，穿透较慢，固定后，组织收缩明显，但不使组织硬化。

苦味酸固定液可以在100毫升蒸馏水中加入苦味酸约1.5克，制成饱和水溶液。固体苦味酸易爆，长制成饱和水溶液保存。

 

升汞又叫氯化汞，是白色粉末，以针状结晶为最纯。通常固定时用饱和水溶液，有时也用70%酒精作溶剂，不单独用作固定剂。升汞的穿透力较弱，通常用于小型材料，对蛋白质有强烈的沉淀作用，硬化程度中等。

固定液用饱和溶液，浓度约为7%。

 

配方

95%酒精 170毫升 蒸馏水 280毫升

福尔马林 60毫升 冰醋酸 20毫升

冰醋酸要在临用前加入。

这时极好的昆虫保存液，常用来杀死和保存小型、身体柔软的种类入螨、蜈蚣、马陆等。在这溶液里加入少量甘油，能防止虫体变脆。

 

配方

纯酒精 6份 冰醋酸 1份

氯仿 3份

这种固定液能固定细胞质和细胞核，尤其适宜于固定染色体，所以多用于细胞学的质片，还用来固定腺体、淋巴组织以及原生动物的胞壳等。这种固定液穿透得快，因此一般小块组织固定20～40分钟，大型材料不超过3～4小时。固定后用95%或纯酒精洗涤，换液两次，移到石蜡中或用80%酒精保存。

 

配方

60%酒精 50毫升 冰醋酸 2毫升

80%硝酸 7.5毫升 升汞 10克

蒸馏水 440毫升

这是常用的固定液，适用于肉质菌类，特别是柔软胶质状的材料如木耳等，也广泛用于无脊椎动物和一般组织和蛙胚的固定。固定时间18～20小时，然后用50%酒精冲洗材料，除去升汞。如果用水冲洗，会使材料膨胀。混合液保存24小时后失效。

 

配方

50%酒精 85毫升 福尔马林 10毫升

冰醋酸 5毫升

这种固定液适用于固定一般植物茎、叶组织，昆虫和甲壳类动物。液组织在这溶液里固定12小时，木质化组织要固定1周，材料也可在此液中长期保存。固定后的材料放在50%酒精中冲洗1～2次。

 

配方

在20%硫酸水溶液内加入苦味酸，直到饱和。

这种固定液适用于鸡胚的固定，也用于许多小型海洋生物的固定。

 

配方

苦味酸饱和水溶液 75毫升 冰醋酸 5毫升

福尔马林 25毫升

这是常用的良好固定剂，渗透迅速，固定均匀，组织收缩少，染色后能显示一般的微细结构。一般动物组织、无脊椎动物的卵和幼虫以及一般组织学、胚胎学的材料，如植物组织的根尖和胚囊都可用它来固定。一般组织固定24～48小时，小块组织固定4～16小时，动物材料能在这种固定液中长期保存。固定后，动物材料用70%酒精冲洗净苦味酸，到无黄色为止（用酒精冲洗时，加几滴氨水，可加快除去黄色）；植物材料用20%酒精冲洗几次。

 

配方

甲液 升汞饱和水溶液 66毫升

95%酒精 33毫升

乙液 冰醋酸 1毫升

甲、乙液要在临用前混合。

这种固定液适用于固定有鞭毛的原生动物、植物的精子和游动孢子等。材料如制作涂布装片，可在40摄氏度下固定10～20分钟。

 

配方

丙酮 40毫升 冰醋酸 1.5毫升

升汞 2克 甲醛 10毫升

蒸馏水 40毫升

这种固定液适用于眼球的固定，并可在固定液中长期保存。

 

配方

甲液 铬酸 1.5克 冰醋酸 10毫升

蒸馏水 90毫升

乙液 福尔马林 40毫升 蒸馏水 60毫升

临用前将等量甲、乙液混合。

高等植物有丝分裂材料适宜在这种固定液里固定或长期保存。

 

配方一

硫酸铜 5克 水 95毫升

这种保存液适用于绿色植物和一切植物绿色部分的保存。植物放入硫酸铜液后，由绿变黄，再由黄变绿。这时取出材料，用清水漂洗干净，浸在5%福尔马林液内长期保存。

配方二

硫酸铜 0.2克 95%酒精 50毫升

福尔马林 10毫升 冰醋酸 5毫升

水 35毫升

先把硫酸铜溶于水中，然后加入配方中的其他组分。绿色标本能长期的贮存在该液中。

配方三

醋酸铜 15～30克 50%醋酸 100毫升

在50%醋酸中逐渐加入醋酸铜，直到饱和。适用时取原液1份，加水4份，即成稀释的硫酸铜溶液。

这种保存液适用于表面有蜡质、蛙质、质地较硬的绿色植物保色。加热稀释到醋酸铜溶液，放入植物，轻轻翻动，到植物由绿转黄再转绿色时取出植物，用清水漂洗后，浸入5%福尔马林液内保存。

 

配方一

甲液 硼酸 3克 福尔马林 4毫升

水 400毫升

乙液 亚硫酸 2毫升 硼酸 10克

水 488毫升

把红色的果实浸在甲液里1～3天，等果实由红色转深棕色时取出，移到乙液里保存，同时在果实内注入少量乙液。

配方二

氯化锌 2份 福尔马林 1份

甘油 1份 水 40份

先把氯化锌溶解在水里，然后加入配方中其他组分。溶液如果浑浊而有沉淀，应过滤后使用。红色果实能在此液中保存。

 

配方一

甲液 硫酸铜 5克 水 95毫升

乙液 6%亚硫酸 30毫升甘油 30毫升

95%酒精 30毫升 水 900毫升

先把植物标本在甲液中浸1～2天，取出洗净后，浸入乙液中保存，同时在果实内注入少量乙液。

配方二

6%亚硫酸 568毫升 80%酒精 568毫升

水 450毫升

植物材料能在这种保存液中长期保存。

 

配方一

95%酒精 20毫升 福尔马林 20毫升

水 60毫升

使用时，取1份原液加9份水稀释，植物材料能在这溶液中保存。

配方二

食盐饱和水溶液 30毫升 水 175毫升

福尔马林 20毫升 甘油 少量

植物材料能在这溶液中保存。

 

配方一

甲液 5%硫酸铜溶液

乙液 1～4%亚硫酸溶液

全白色植物材料能浸在乙液中保存。杂有绿色的白色植物材料先浸在5%硫酸铜溶液内1～3天，用清水漂洗后浸在乙液中保存。

配方二

氯化锌 32克 95%酒精 125毫升

水 1000毫升

把氯化锌溶于水中，再加入酒精。植物材料能在这溶液中保存。

 

甲液 福尔马林 4毫升 醋酸铜 1克

硝酸钾 1克 水 100毫升

乙液 甘油 20毫升 醋酸钾 10克

福尔马林 1毫升 水 100毫升

先把昆虫幼虫放在80摄氏度热水中烫死，晒干后放在甲液中固定1星期左右，最后放入稀释一倍的乙液中保存。

配方二

甲液 95%酒精 90毫升甘油 2.5毫升

福尔马林 2.5毫升 冰醋酸 2.5毫升

氯化铜 3克

乙液 冰醋酸 5毫升 福尔马林 4毫升

水 100毫升

将绝食1～2天的幼虫，用注射器从肛门向体内注射甲液，12小时后转入乙液内保存，约20天更换1次乙液。

 

甲液 苦味酸饱和液 10毫升 冰醋酸 5毫升

福尔马林 2.5毫升

乙液 与绿色幼虫保存液配方二乙液相同

用注射器从幼虫肛门内注入甲液，12小时后转入乙液内保存。

 

硼砂 2克 50%酒精 100毫升

昆虫幼虫能在这溶液中保存。

 

甲液 福尔马林 200毫升 硝酸钾 15克

醋酸钾 30克 水 1000毫升

乙液 甘油 200毫升 醋酸钾 100克

麝香草酚 2.5克 水 1000毫升

先把材料放在甲液内固定，固定时间根据材料的大小而定，一般需1～5天。当材料失去自然色泽而呈暗褐色时，用手轻轻挤压，直到没有淡红色血水流出时，取出材料，用清水冲洗，在浸在85%酒精中3～24小时（不能太久，否则易破坏色素），到血色恢复后，浸在乙液中保存。