健康人群大肠埃希菌耐药情况调查

【摘要】  目的  了解浦东新区健康人群 肠埃希菌耐药菌流行情况 方法  用VITEK进行菌 鉴定后，K-B法做药敏实验，结果根据美国国家临床实验室标准委员会（NCCLS 2004）进行判断。结果  健康人群肠道大肠埃希菌地耐药现象非常普遍， 重耐药（耐药 量≥2，中介耐药计 耐药）百分率为96%(192 )；所检测的17种抗生素中，红霉素、链霉素、四环素均有很强的强耐药性，敏感性较强的几种抗生素为头孢唑啉、头孢噻肟、头孢噻吩、氯霉素、亚胺培南、丁胺卡那霉素、呋喃妥因、妥布霉素、大观霉素；结论  上海市浦东新区健康人肠道大肠埃希菌对多种抗生素具有较强的耐药性。控制抗生素的滥用，包括在人类和食用动物中的滥用，制定相关的监督机制，是我国公共卫生政策的当务之急。

    　　【关键词】  健康人；大肠埃希菌；耐药性

　　【Abstract】  Objective   To study the prevalence of drug-resistance of E.coli in Pudong New Area.Methods  Identify the isolates with VITEK，test their drug-resistance with K-B method and then interprete the result according to National Committee Clinical Laboratory Standards (NCCLS) guidelines. Results  The drug-resistance of E.coli in the entestine of healthy people is prevail. About 96%(192 of 200)of tested isolate are multi-drug resistance.(resisting to at least 2 types of antibiotic drug). In the 17 biochemical-drug tested，streptomycin，tetracycline are highly resistant，while the drug-resistance rates to cefozolin，cefoxitin，cefotaxime，chloramphenical，imepenem，nitrofurantoin，tobromycin，amikacin，spectinomycin are very low. Conclusion  The E.coli in the entestine of healthy people in Shanghai Pudong New Area is strongly multiresistant to an array of antibiotics. It is of major importance for the public health policy to control the abuse of antibiotics in human beings as well as in food animals.

　　【Key words】  healthy people；E.(Escherichia)coli； drug resistance

    细菌耐药现象已经成为全世界临床医生和微生物学家关注的问题，多重耐药菌引起的感染使治疗难度大大提高。由于我国在人群和动物中广泛存在抗生素的不合理使用现象，健康人体内的正常菌群也可能出现耐药。 旦健康人体内普遍出现耐药菌群，问题的严重性就大大增加。我国目 还没有 方面的资料。本研究旨在了解健康人大肠埃希菌的耐药情况，为耐药性研究提供资料。

　　1  材料

　　1.1  麦康凯平板、MH肉汤、MH琼脂培养基、氧化酶试剂、革兰染色试剂。

　　1.2  VITEK32（生物梅里埃公司），革兰阴性杆菌（GNI）板条（生物梅里埃公司）。

　　1.3  药敏纸片（上海市疾病预防控制中心）。

　　2  方法

　　2.1  收集健康人群粪便标本 

　　样本来源于从业人员健康体检肛拭标本。为了使样本具有代表性，在收集标本时，进行问卷调查，剔除长期使用抗生素者或由于任何原因在近3个月内使用过抗生素者，并将标本分类为上海本地人（包括在上海居住2年或2年以上的外地人）和外地人。

　　2.2  大肠埃希菌的分离培养 

　　标本直接画线接种于麦康凯平板，37℃培养24h，挑取可疑菌落，接种三糖铁斜面，37℃培养24h，产酸产气不产H2S者做革兰染色和氧化酶实验。用VITEK实验进行确认。具体操作参照仪器操作说明进行。

　　2.3  大肠埃希菌耐药性 

　　检测方法根据纸片扩散法（即K-B法）进行，结果判断根据美国国家临床实验室标准委员会（NCCLS 2004）的规定，标准菌株为大肠埃希菌ATCC25922，金黄色葡萄球菌ATCC25923，铜绿假单胞菌ATCC27853。所检测的抗生素包括阿莫西林、头孢唑啉、头孢噻吩、头孢噻肟、阿米卡星、红霉素、链霉素、亚胺培南、丁胺卡那霉素、呋喃妥因、氟哌酸、四环素、复合磺胺、妥布霉素、大观霉素、甲氧葡胺嘧啶、庆大霉素等17种常用抗生素。

　　3  结果

　　3.1  健康人群肠道大肠埃希菌的耐药现象非常普遍，200株大肠埃希菌中，仅有1株埃希菌对所检测的17种抗生素均敏感，其它199株埃希菌对1种或1种以上的抗生素耐药或中介耐药。多重耐药（耐药数量≥2，中介耐药计为耐药）百分率为96%(192个)。有32％（64株）的被检大肠埃希菌对5种或5种以上的抗生素耐药，有12.5%(25株)的对7种被检大肠埃希菌对7种或7种以上的抗生素耐药。其中，有一株大肠埃希菌（132＃）对14种抗生素耐药，仅对亚胺培南、呋喃妥因、大观霉素3种抗生素敏感。

　　3.2  所检测的17种抗生素中，红霉素、链霉素、四环素均有很强的强耐药性。其中，耐药性最强的是红霉素，耐药率为98％(196株)，仅有2％（4株）大肠埃希菌敏感。其次是四环素，耐药率为94.5％（189株）。对链霉素（80％），阿莫西林（37％），复方磺胺（35％），甲氧葡胺嘧啶(42%)的耐药性也较高。氟哌酸（13.5％），庆大霉素（15.5％）有也一定的耐药性。据统计，耐药性较低的几种抗生素为头孢唑啉（3％）、头孢噻肟（2%）、头孢噻吩（9％）、氯霉素（7.5％）、亚胺培南（0）、丁胺卡那霉素（0.5％）、呋喃妥因（1％）、妥布霉素（7％）、大观霉素（0）。其中，亚胺培南、大观霉素的敏感性为100％，丁胺卡拉霉素、呋喃妥因的敏感性分别为99.5％和99％。

　　3.3  耐庆大霉素的大肠埃希菌100％多重耐药，且多数对数种抗生素耐药。耐庆大霉素的大肠埃希菌中，有93.1％（29株中有27株）对5种或5种以上的抗生素耐药，58.6％（29株中有17株）对7种或7种以上抗生素耐药，高于对庆大霉素敏感的大肠埃希菌的21.6％和4.7％。见表1。表1  庆大霉素耐药和庆大霉素敏感的大肠埃希菌多重耐药比较  例(略)注：P＜0.01

　　3.4  实验标本（200例）中，有72.5％（145例）上海本地人（将在上海连续居住2年或2年以上者归为上海人），27.5%（55例）来自外地。对2种或2种以上的抗生素耐药的比率，外地人为98.2％(54例)，高于上海人为95.1％（138例），对3种或3种以上抗生素耐药的耐药率，外地人为57.4％（31例），高于上海本地人的43.8％（63例）。

　　4  讨论

　　抗生素耐药性问题已成为全世界临床微生物学家关注的焦点，而我国是全世界滥用抗生素最为严重的国家之一，据报道，我国80％的住院病人，都使用过抗生素，其中，89％是经验用药。由于抗生素的不合理使用，细菌已产生了非常严重的耐药性，甚至于有人认为，我国将进入“后抗生素时代”，即无药可治的年代。据统计，住院感染患者耐药菌引起的医院感染人数，已占到人数的30％左右。那么，耐药性对健康人的影响程度如何，普通人群中体内的正常菌是否也具有耐药性，其耐药程度如何？我们不得而知。

　　我们知道，肠道大肠埃希氏菌中许多菌株携带有可传播的质粒，耐药性可通过这些质粒同种或异种细菌之间传播，它不但可使原先敏感的正常菌群获得耐药性，而且可使原先敏感的致病菌获得耐药性。此外，正常人不断排出具有耐药性的大肠埃希氏菌，可通过环境污染在人群之间传播。因此，研究健康人群肠道大肠埃希氏菌耐药性，可了解目前由于抗生素的不合理使用在整个健康人群中的影响，同时对大肠埃希氏菌感染的抗生素经验治疗，控制感染性疾病及细菌性传染病具有重大指导意义。

　　本研究显示，上海市浦东新区健康人肠道大肠埃希菌对多种抗生素具有较强的耐药性，200株大肠埃希菌中，对所检测的17种抗生素均敏感的菌珠仅为0.5％（1例），而多重耐药率高达96％（192例），甚至发现对14种抗生素耐药的细菌。耐药性最强的几种抗生素为红霉素（98％）、链霉素（80％）、四环素（94.5％），耐药性均达80％以上，而阿莫西林（37％）、复方磺胺（35％）、甲氧葡胺嘧啶（42％）的耐药性也较高，已失去了经验用药的价值。较为敏感的几种抗生素是头孢唑啉（3％）、头孢噻肟（2％）、头孢噻吩（9%）、氯霉素（7.5）、亚胺培南（0）、丁胺卡那霉素（0.5％）、呋喃妥因（1％）、妥布霉素（7％）、大观霉素（0），其中，无一例对亚胺培南、大观霉素两种抗生素耐药。这些结果与临床分离的大肠埃希菌的药敏结果［1］基本吻合，但略有不同。

　　有研究认为［2］，耐庆大霉素是筛选多重耐药大肠杆菌的唯一准则，因为95%的耐庆大霉素的大肠菌是多重耐药菌，而且没有一株多重耐药大肠杆菌对庆大霉素敏感。本研究显示，耐庆大霉素的大肠埃希菌100％多重耐药，且多数对数种抗生素耐药。有93.1％（29株中有27株）的耐庆大霉素的大肠埃希菌对5种或5种以上的抗生素耐药，58.6％（29株中有17株）对7种或7种以上抗生素耐药，高于对庆大霉素敏感的E.coli的21.6％和4.7％，说明庆大霉素耐药和多重耐药之间可能存在某些联系，对庆大霉素耐药的Ecoli 容易出现多重耐药，但并不意味着多重耐药大肠杆菌一定对庆大霉素耐药。

　　本研究显示，外地人肠道大肠埃希菌的耐药性较浦东本地人高，这可能是由于浦东经济较发达，在控制抗生素滥用方面相对较严格。

　　正常人大肠埃希菌产生耐药性的原因：抗生素的不合理使用；耐药基因在同种和异种细菌间的传播；食品中抗生素的残留。一些抗生素，如红霉素、四环素，由于已经使用了相当长的一个时期，耐药性已广泛存在，并且，由于其较强的毒副作用，近几十年来，临床上已很少使用，但本研究仍然显示很强的耐药性。分析原因可能有二：一是耐药性一旦出现，很难消除［2，3］，二是这些被淘汰的抗生素，由于价格低廉，广泛地用于家禽家畜的促生长剂及预防和治疗用药，在家禽家畜体内大量蓄积，人食用这些食品后，产生耐药性。据报道，食用动物体内大肠菌耐药现象十分严重［4］，这些耐药性可能通过水平传播传递给人类的肠道菌。控制抗生素的滥用，包括在人类和食用动物中的滥用，制定相关的监督机制，是我国公共卫生政策的当务之急。

耐药性在细菌与细菌间的水平传播，由于速度快，范围大，是细菌产生耐药性的重要原因，也是临床微生物学家关注的焦点。据报道，从未接触过抗生素的细菌，也可能产生耐药性，这种耐药性来源于耐药基因的水平传播。目前研究的较多是整合子。健康人群间耐药性通过基因水平传播的机制，是笔者要进一步研究的课题。

作者：白云，李婷，吴红岩，沈小明，赵冰，杨玲凤，陆岚，《中华医药杂志》

　　【参考文献】

　　1  岳向容，袁莉，董卫.1652例尿液细菌培养及药敏结果分析.国外医学·临床生物化学与检验学分册，2005，26（8）：207-208.

　　2  Maurine A，Leverstein-van Hall，Adrienne T.A. Box，et al. Evidence of Extensive Interspecis Transfer of Intergron-Mediated Antimicrobial Resistance Gene among Mutidruge -Resistant Enterobacteriaceae in a Clinical Setting. J of Infections Diseases，2002，186：49-56.

　　3  Didier M，Broderick D，Vera A.W，et al. Antibiotic Resistance in the ECOR Collection：Integron and Identification of a Novel aad gene.

　　4  Lydia Bass，Cynthia A. Liebert，Margie D. Lee，et al. Incidence and Characterization of Integrons，Genetic Elements Mediating Multiple-Drug Resistance in Avian Escherichia coli  Antimicrobial Agents and Chemotherapy，1999，12(43)：2925-2929.

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