头孢哌酮钠细菌内毒素检查方法研究

【摘要】 目的  通过试验确定头孢哌酮钠细菌内毒素的具体检测方法 方法  选择相应灵敏度的鲎试剂，进行干扰试验，研究细菌内毒素检查方法。结果  用灵敏度0.125EU/ml的鲎试剂，同时将供试品2倍稀释，进行细菌内毒素检查，没有出现干扰作用。 结论  头孢哌酮钠的热原检查可用细菌内毒素检测法。

   

    头孢哌酮钠属于β-内酰胺类抗生素，临床上主要用于治疗革兰阴性菌、绿脓杆菌引起的呼吸系统、泌尿系统的感染。《中国药典》2000年版头孢哌酮钠的热原检查仍采用家兔法， 了探讨其细菌内毒素检查方法，本文参照《中国药典》的要求，通过干扰试验，确立了头孢哌酮钠的细菌内毒素检查方法。

    鲎试剂（TAL，批号:0312081，灵敏度:0.125EU/ml，规格:0.1ml/支，湛江安度斯生物有限公司）;细菌内毒素检查用水（BET水，批号:0403080，规格:5ml/支，湛江安度斯生物有限公司）;细菌内毒素工作标准品（CSE，批号:0401170，规格:12EU/支，湛江安度斯生物有限公司）;头孢哌酮钠（供试品，批号:31820907，31820204，31820610，珠海联邦制药厂生产）;BET-40细菌内毒素检查仪;ZH-2自动旋涡混合器。

    2.1 TAL灵敏度的复核 按《中国药典》附录 ［1］ 细菌内毒素检查法进行复核，结果见表1，表明标示灵敏度为0.125EU/ml的TAL符合规定。

    表1 鲎试剂灵敏度的复核 内毒素浓度（略）

    2.2 细菌内毒素限值（L）的确定 ［2］  按公式L=K/M，式中K为规定给药途径，即人用每公斤体重每小时最 可接受的内毒素剂量，注射剂K=5.0EU/（kg·hr）;M为人用每公斤体重每小时最大剂量，以ml/（kg·hr）、mg/（kg·hr）、U/（kg·hr）表示，人均体重按60kg计算，注射时间小于1h按1h计算。参考药师手册 ［3］，M=100mg/（kg·hr），计算内毒素限值L=0.05EU/mg。

    2.3 供试品的干扰预试验

    2.3.1 内毒素及供试品的稀释 用BET水将CSE稀释成0.25、0.125、0.06、0.03EU/ml浓度的内毒素备用;根据最大有效稀释倍 MVD=CL/λ，L为供试品的细菌内毒素限值，λ为本次试验选用的鲎试剂的灵敏度;C为供试品溶液的浓度5mg/ml，由此计算得最大有效稀释倍数MVD为2倍。对于灵敏度0.25、0.125、0.06、0.03EU/ml的鲎试剂，头孢哌酮钠选择稀释倍数分别为1、2、4、8倍，用BET水将1批供试品（批号31820907）稀释成以上4 浓度备用。

    2.3.2 干扰预试验 取10支灵敏度为0.125EU/ml的鲎试剂，其中5支做供试品阴性对照（NPC）系列反应;另外5支做供试品阳性对照（PPC）系列反应。试验结果见表2。表明供试品阴性对照液系列反应全部阴性。供试品阳性对照液在供试品稀释倍数<2时为阴性，≥2时为阳性。表明供试品在较高浓度时对细菌内毒素有抑制干扰作用，而供试品至少2倍稀释并选用灵敏度为0.125EU/ml的鲎试剂则无干扰作用。

    表2 头孢哌酮钠预试验结果 供试品（略）

    2.4 供试品干扰试验 用细菌内毒素检查用水和稀释2倍的3批供试品分别将同 支细菌内毒素工作标准品制成含细菌内毒素工作标准品0.25EU/ml、0.125EU/ml、0.06EU/ml、0.03EU/ml4 浓度的内毒素溶液，每一浓度平行做4支，另取细菌内毒素检查用水和供试品溶液各2支作为水溶液阴性对照管和供试品阴性对照管.分别对31820907、31820204、318206103批样品做干扰试验。结果见表3。表 明λc=λs=0.125EU/ml，即λc、λs都在0.5～2λ范围内，表明供试品经2倍稀释，使用灵敏度0.125EU/ml的鲎试剂对细菌内毒素无干扰，进一步验证了预实验的结果。

    表3 供试品干扰试验结果 内毒素浓度（略）

    2.5 细菌内毒素检查 根据《中国药典》细菌内毒素检查法，将3批供试品2倍稀释，与0.125EU/ml鲎试剂进行细菌内毒素检测，并同时进行3批供试品的家兔热原对比试验，均符合药典对其有效性的规定。

    3.1 干扰预试验的目的是评价供试品浓度对鲎试剂与细菌内毒素凝集反应的干扰程度，以便初步筛选出其干扰试验的起始浓度。 样既可以避免干扰试验的盲目性，同时又节省了大量的时间和鲎试剂，降低了成本，提高了工作效率。

    3.2 热原检查可用细菌内毒素检查代替家兔法，检查时只要将其稀释，选择相应灵敏度的鲎试剂即可进行。

    3.3 通过试验表明，头孢哌酮钠热原检查可用细菌内毒素检查法代替传统的家兔法，检查时只要将其至少2倍稀释，选择相应灵敏度的鲎试剂，即可进行。该法与传统的家兔热原法相比，具有操作简便快捷，结果准确，检测灵敏高，实用性强等优点。

 

    1 国家药典委员会.中国药典，北京:化学工业出版社，2000年版（二部）:附录XIE.

    2 夏振民.药品细菌内毒素检查的限值.药物分析杂志，1995，15（3）:54.

    3 裘学友，孙定人，喻维新.药师手册，北京:人民军医出版社，1999，323.