一株不典型金黄色葡萄球菌的分离鉴定

2005年9月，本中心接到报告，有2例因吃蛋糕引起的以呕吐、腹痛、腹泻 主要症状的患者，我们立即 往采样，并在2例患者吃剩的蛋糕中检出 株不典型的金黄色葡萄球菌，现将分离鉴定的过程报告如下

    1  材料与方法

    1.1  材料  检验材料为患者吃剩的蛋糕。

    1.2  方法

    1.2.1  实验仪器和试剂  实验仪器：恒温培养箱、梅里埃ATB  Expression 细菌鉴定仪及VIDAS免疫诊断分析系统，试剂：甘露醇高盐琼脂购自广东环凯微生物科技公司，血平板（使用人血）、卵黄琼脂平板、1mol/L的盐酸、3%H2O2为本单位自制，生化鉴定用的ID32 STAPH细菌鉴定卡及VIDAS葡萄球菌肠毒素试剂盒为法国梅里埃公司生产，其余均购自北京陆桥技术责任有限公司，试剂均在有效期内使用。

    1.2.2  检验方法  按GB/T4789.10—2003《食品卫生微生物检验》［1］，DNA酶测定按《微生物学和微生物学检验》［2］中的方法，细菌鉴定卡、葡萄球菌肠毒素的检测按法国梅里埃试剂使用说明书操作。

    2  结果

    2.1  增菌及分离  剩余蛋糕经7.5％NaCl肉汤增菌后，同时接 于血平板、甘露醇高盐琼脂平板上，37℃培养24h后，取出观察菌落形态，在血平板上见白色、不透明、圆形、光滑、突起、周围有透明溶血圈、直径约1mm的小菌落；在甘露醇高盐琼脂平板上见黄色、圆形、光滑、突起、直径约1mm的优势菌落。挑起以上两种形态的单 菌落各3个做革兰染色镜检，均为革兰阳性球菌、部分呈葡萄状排列，同时接种于营养琼脂平板和双糖管上，置37℃、24h做纯培养。取纯培养物划线接种Baird-Parker平板及卵黄琼脂平板上，置37℃、24h培养，在Baird-Parker平板呈圆形、光滑、突起、黑色、其周围却不见浑浊带和透明圈，且直径约为0.7～1mm。在卵黄琼脂平板上呈圆形、光滑、突起、原始区的菌苔呈淡黄色、单个菌落呈白色、直径约为1～1.3mm、其周围可见浑浊带和透明圈。

    2.2  生化试验  取营养琼脂平板上的纯培养菌落做下列生化试验：氧化酶(-)，触酶(+)，血浆凝固酶：玻片法(+)，试管法(+)，DNA酶(+)，按要求将菌液接种于ID32 STAPH细菌鉴定卡，置37℃培养24h后用梅里埃ATB细菌鉴定仪自动读 ，判断为非常好的鉴定结果，99.7%符合金黄色葡萄球菌，全部生化反应见表1。将菌株送厦门市CDC做葡萄球菌肠毒素检测，用自动定量酶联荧光免疫分析法测定，选用法国梅里埃公司生产VIDAS葡萄球菌肠毒素(SET2)试剂盒，产品编号：30705，结果判断：TV值小于0.13为阴性、 于或等于0.13为阳性，在此试验中阴性质控样TV值为0.00、阳性质控样TV值为1.00、菌株的TV值为2.32，即该菌株葡萄球菌肠毒素为阳性。表1  生化反应结果

    3  讨论

    典型的金黄色葡萄球菌在血平板上的菌落形态为金黄色、圆形、光滑、大而突起、周围有溶血圈；在Baird-Parker平板上为圆形、光滑、突起、直径约2～3mm、菌落中心呈灰黑色、周围有一浑浊带，在其外层有一透明圈。而此次分离到的金黄色葡萄球菌在血平板上虽为圆形、光滑、周围有溶血圈，但因其不产生色素而呈白色，且菌落较小直径约1mm；在Baird-Parker平板上虽呈黑色、其周围却不见浑浊带和透明圈（可能是冻干的卵黄较难溶解之故），直径约为0.7～1mm，很容易导致漏检，又因此菌株为能引起食物中毒的肠毒素阳性的金黄色葡萄球菌，所以提醒各位同仁在金黄色葡萄球菌的检验中，不仅要注意典型菌落，对 种在血平板上呈白色、有透明溶血圈、较小的菌落也要重视，建议先做革兰染色镜检及血浆凝固酶试验筛检，若符合，再继续做各项试验鉴定，以提高金黄色葡萄球菌的检出率，防止漏检。

    【参考文献】

    1  中华人民共和国卫生部/中国国家标准化管理委员会．GB/T4789.1～4789.31-2003，67-69.食品卫生微生物检验.

    2  俞树荣.微生物学和微生物学检验，第2版．北京：人民卫生出版社，114.

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