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农药残留快速检测方法在蔬菜中的应用探讨



录入时间:2011-3-31 14:14:36 来源:医源世界

【摘要】  目的 探讨农药残留的快速检测方法 方法 采用快速测定方法—酶抑制法。 结果 通过对5 添加农药的蔬菜测定,其回收率 85%~105%,与气相色谱法的测定结果基本 致。结论 酶抑制法可以用于蔬菜中农药残留的快速测定。
【关键词】  农药残留;酶抑制法;气相色谱法;测定
     目 我国有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的分析方法有气相色谱法、薄层色谱法以及快速测定方法—酶抑制法。气相色谱法虽是国家标准方法,但要求条件较高,必须具备气相色谱仪并配有火焰光度检测器(FPD)或氮磷检测器(NPD),有适合的色谱柱等,需要昂贵的仪器设备;薄层色谱法检测方法繁杂,操作难度较 ;酶抑制法虽然不是国标法,但具有检测快速、设备和试剂简单、成本低等特点,适合水果蔬菜上市前农药残留毒性的检测,受到基层疾病预防控制机构的普遍欢迎。
    1   材料与方法
    1.1   试剂配制   (1) pH8.0缓冲溶液:分别取11.9g无水磷酸氢二钾与362g磷酸二氢钾,用 1000ml蒸馏水溶解。(2)显色剂4g/L:分别取80mg二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)和15.6 mg碳酸氢钠,用20ml缓冲溶液溶解,置于4℃冰箱中保存。(3)底物21.67g/L:取65mg硫代乙酰胆碱,加3.0ml蒸水溶解,摇匀后,置4℃冰箱中保存备用。(4)乙酰胆碱酯酶:3.0mg/L用缓冲溶液溶解,摇匀后,置4℃冰箱中保存备用。(5)有机磷标准储备液:将从国家农药质检中心购买的甲氨磷、敌百虫、乐果、克百威和灭 威饵品用丙酮配制成1g/L的溶液。标准使用液临用前配制。
    1.2   使用仪器    CL-F2000残留农药测定仪(上海复淳软件科技发展有限公司);气相色谱仪:上海天普分析仪器有限公司GC900A高性能气相色谱仪。
    1.3   操作方法   每 样品做平行样,首先在试管中加入有机磷标液后,然后分别加入3.0ml缓冲液,50μl乙酰胆碱酯酶液,100μl显色剂,摇匀后,在37℃放置15min,加入40μl底物;在0.5min内混合均匀,30s后,立即用F2000测定仪进地测定,F2000型快速测定仪记录1min酶抑制率I%,CK为酶活性的大小。
    计算公式:回收率(%)=(I%/I0)×100
    式中I%—(菜 +标)提取后测定的抑制率减去菜的空白抑制率;
    I0%—直接测定加入农药抑制率。
    2   结果与讨论
    2.1   条件选择
    2.1.1   酶活性的测定   分别加入20、40、80μl酶,其他试剂为缓冲溶液3ml,显色剂100μl,底物20μl。测定结果可见,1、2、3 min的线性相似。但酶活性随着酶的 量增加而增加。随着时间的变化,酶的活性不断下降。因此,测定的时间应定为 1或 2 min之内。酶量较少时,灵敏度较低,但酶量大时,灵敏度虽高,但变化较快,使反应不稳定,故取中间值50μl的酶量较佳。
    2.1.2   温度、时间、底物与条件的选择   在室温放置与水浴37℃放置酶的活性不同,37℃放置15和20min,酶的活性也不同。实验结果表明,温度过低与时间过长,酶的活性均较低;37℃放置15min反应,酶的活性较高。底物应足够量,否则,反应不够完全。故取40μl底物为佳。
    2.2   标准曲线的测定   将 6种农药1g/L的丙酮标准储备液,用蒸馏水稀释为甲氨磷10mg/L,毒死蜱100mg/L,敌百虫0.1mg/L,乐果100mg/L,克百威1mg/L,灭多威10mg/L。抑制率:甲氨磷为84.55%,毒死蜱为98.45%,敌百虫为94.32 %,乐果为48.43 %,克百威为92.76 %,灭多威为88.85 %。克百威、敌百虫的相关系数可达到0.99,其他几种农药达到0.96~0.9,由此证明本方法可以作为筛选方法,确证还需要经过气相色谱法测定。
    2.3   回收率   在蔬菜中添加农药,用快速测定仪测定,见表1。表1   回收率测定结果由此可见,蔬菜中加标的回收率为85%~105%,能满足实验要求。
    2.4   精密度   按照2.3添加农药标准,用快速测定仪测定。由此可见精密度范围在0.9%~4.3%,满足实验要求。
    2.5   样品测定结果   将加标样用快速检测方法和气相色谱法测定,样品取样量为10.0g。测定结果表明,两种方法测定结果基本一致。
    3   结论
    综上所述,可以得出快速测定法—酶抑制法能够可满足大批样品农药残留的筛选,但对于抑制率超过30%的样品,应及时进行气相色谱的分析,以进一步确定农药的种类和浓度。
    4   注意问题
    4.1   快速测定法时间   加入底物混匀30s后定时,1min后测定。并保证混匀过程时间一致,一般实验人员都可在30s内操作完毕。
    4.2   温度和时间   酶抑制的温度和时间对酶的活性影响较大,应该严格控制。
    4.3   气相色谱测定   如果有机磷或氨基甲基甲酸酯类品种增加,可适当增加色谱的柱长度。
 
 作者:马爱霞《中华医药杂志》

 

 

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