金黄色葡萄球菌医院感染的临床和基因遗传聚类分析

摘要　目的　 控制医院金黄色葡萄球菌感染，揭示其病原体特性及流行病学规律 方法　对28例金黄色葡萄球菌感染患者的临床资料和病原菌的药敏试验和PRAD基因聚类进行分析。结果　医院感染患者MRAS占60.71%，MSSA39.28%，病原体对青霉素耐药率达86.1%，对常用 二代头孢菌素和喹诺酮药物的敏感率低于40%。噬菌体Ⅲ型构成比占60.7%，PRAD聚类分型产生3 聚类群。结论　对感染患者进行临床和细菌病原学特征分析，可提供病原菌传播与生存的本质资料。

　　Clinical and genetic cluster analysis of

　　nosocomial infect ion of Staphylococcus aureus

　　Jin Guiming　Zhang Xiaozhen　Wang Yingqun　Ding Jinbing

　　Wuhan General Hospital of Guangzhou Region PLA, Wuhan 430070

　　Abstract　OBJECTIVE　To control nosocomial infection of Staphylococcus aureus and to reveal the epidemiology of infectio n. METHODS　The clinical data, drug sensiti vity test and RAPD assay of Staphylococcus aureus from 28 patients were isolated and analized. RESULTS　Hospital-acquisiti on of MRSA occurred in 60.71%, whereas MSSA occurred in 39.28% of patients. The r esistant rate of pathogens to penicillin was 86.1% and the sensitivity rates to 1st and 2nd generation of cephalosporins and quinolones were less th an 40%. The 28 strains could be classified into 3 clusters by RAPD assay and 60. 7% of them belonged to group Ⅲ by phage typing. CONCLUSION　 By investigation of clinical background and identifica tion of the characteristics of the pathogens, the epidemiology of nosocomial inf ection may be revealed.

　　Key words　Staphylococcus aureus　Nosocomia l infection　Genetic cluster anlysis

　　金黄色葡萄球菌(金葡菌)是引起医院感染常见的病原菌之一，近年来文献报道金葡菌对甲氧西林的耐药率不断升高［1、2］，给临床治疗带来困难。为控制金葡菌医院感染，我们调查分析了金葡菌感染患者的临床和病原体特征，以揭示流行病学的规律。

　　1　材料与方法

　　1.1　调查对象　1997年1～12月对我院呼吸内科和神经内科住院患者，有感染体征并在送检标本中分离到金葡菌者，列为调查对象。

　　1.2　调查方法　对患者的感染部位、住院时间、治疗经过以及细菌学检查进行临床调查。

　　1.3　病原体特性鉴定

　　1.3.1　常规鉴定方法　来自患者痰、尿、血培养物，分离病原株革兰氏染色阳性的葡萄球菌，试管凝固酶阳性鉴定为金葡菌。对照标准菌株(金葡菌AB91053、94005)由中国武汉典型培养物保藏中心提供。

　　1.3.2　噬菌体分型　采用成都卫生部生物制品研究所提供的分型噬菌体，以常规稀释度RTD和100KTD滴定后，观察其结果［3］。

　　1.3.3　遗传聚类图绘制　首先进行随机 态性(RAPD)分析［4］。将图谱通过凝胶成像系统(Stratagene公司生产)扫描成像，采用PHYLIP3.5CRAPD分析软件分析得到指纹图谱，据此绘制菌株之间的遗传聚类图［5］。

　　1.4　医院感染诊断　依据《医院感染学》中的诊断标准［6］。

　　2　结　果

　　2.1　临床分类　金葡菌感染病例28人，其中院内感染21例(75%)，院外感染7例(25%)。感染部位以肺部感染为主23例(82.14%)，全身感染3例(10.71%)，尿路感染1例，口腔感染1例(3.57%)。院内感染发生的时间，除1例为第124天外，其余14～65天，平均为32.3天。基础疾病肺心病6例、肺癌术后8例、支气管扩张1例、脑溢血6例、脑梗塞5例、红斑狼疮1例、败血症1例。

　　2.2　细菌分类及药敏　院内感染21株金葡菌，耐甲氧西林(MRSA)14株(66.67%)，甲氧西林敏感菌(MSSA)7株(33.33%)。7例院外感染金葡菌MRSA1株(14.28%)，MSSA6株(85.71%)。28株金葡萄对万古霉素敏感率达100%，舒普深、氧氟沙星、丁胺卡那的敏感率达90%以上，对头孢拉啶、先锋Ⅴ号、头孢呋肟及环丙沙星、诺氟沙星的敏感率低于40%以下，对青霉素的耐药率达86.1%。

　　2.3　噬菌体分型　28株金葡菌作噬菌体可分型25株，分型率为89.29%构型，以Ⅲ群为主，其构成比为60.7%，其次是混合群14.2%，Ⅰ群7.1%，Ⅴ群和其它类型各1株(3.5%)，Ⅱ群为零。

　　2.4　RAPD聚类分型　15株病原菌的14株及2株标准株产生特异性谱型，遗传聚类分型可将8株临床株和1株不相关株分为3个类群。

　　2.5　抗生素使用　全部患者预防或治疗使用了抗生素，其中头孢类占67.85%，喹诺酮类占42.85%，氧哌嗪青霉素14.29%，林可霉素35.71%。抗生素持续使用时间9～22天，平均14.2天。

　　3　讨　论

　　3.1　金葡菌在医院感染病原菌中占有重要的位置，尤其是MRSA因其多重耐药，治疗效果差而倍受医院感染控制人员的关注。据日本1990年43所国立 学调查［7］，MRSA分离频 平均为52.52%，最低27.2%，其中住院患者占65%，门诊占23%。我院金葡菌感染的MRSA分离数仅为53.57%，低于1990年武汉协和医院76.6%和1995年上海华山医院80.8%的分离数［8、9］，分析其原因我院是一所部队医院，在收治患者的危重程度和抗生素使用上，与地方教学医院尚存在差异。

　　3.2　本组资料表明，医院感染患者中MRSA的检出率明显高于院外感染患者，两者相比差异非常显著(P＜0.05)。据文献报道［7］，住院1周内MSSA和MRSA检出率分别为17.0%和36.2%，而住院1个月及1个月以上者检出率分别为31.2%和62.5%，后者极明显高于 者。尤其是使用抗生素两周以上者可成为MRSA产生的易感染因素。

　　3.3　金葡菌的噬菌体分型可进一步识别细菌的特性，本组金葡菌构型主要是Ⅲ型，其次是混合型，符合文献报道的MRSA的噬菌体分型多为Ⅲ型和混合型，MSSA的Ⅱ型高于MRSA组［7］。

　　3.4　作者曾将本组资料中14株病原株的RAPD谱型作过比较［4］，其谱型均不同。6、7号来自于同一患者相同部位、不同时间的分离株，在RAPD谱型上存在细微差异，但反映到聚类分型结果上两者遗传关系最近， 表明RAPD技术能够较好地反映分离株之间的克隆关系。

综上所述，通过对金葡菌感染的患者进行临床、病原菌的药敏试验和RAPD基因聚类系统地分析，了解其临床资料和病原菌特性的相关特性，可为医院感染及微生物流行病研究，提供了细菌传播与生存的本质资料。

 

作者：靳桂明　张晓珍　王颖群　丁进兵《中华医院感染学杂志》

　　参考文献

　　1　李胜利,张婴元,吴菊芳等.葡萄球菌医院感染的调查研究.中华医院感染学杂志,1998,8(2):65

　　2　WKLY-Epiclemiol-Rec.1996,8;71(10):73

　　3　王根春,吉颖,田梅兰等.180株金黄色葡萄球菌噬菌体分型报告.中华医学检验,1992,(4):227

　　4　王颖群,靳桂明,张晓珍等.金黄色葡萄球菌随机扩增DNA多态性分型研究.中华医院感染学杂志,1998,8(4):206

　　5　Van Belkum A, Kluytmans J, van Leeuwen W et al. Multicenter evaluation of arbitrarily primed PCR for typing of St aphylococcus aureus. J Clin Microbiol, 1995, 33: 1537

　　6　王枢群,张邦燮.医院感染学.重庆:科学技术文献出版社重庆分社,1990.274～285

　　7　山口惠山,池.MRASの发生と现代化学疗法の反省.日本临床,1992,50:5

　　8　朱德妹,汪复,刘陈谊等.上海地区甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌的研究.中华传染病杂志,1988,6(1):2

　　9　戴立人,向友华.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌医院内感染及其监测.中华医学杂志,1992,72(8):465