1目的
1.1理解冷冻干燥保藏菌种的原理
1.2掌握冷冻干燥保藏菌种的方法。
2 原理
冷冻干燥保藏菌种法可克服简单保藏方法的不足。利用有利于菌种保藏的—切因素，使微生物始终处于低温、干燥、缺氧的条件下，因而它是迄今为止最有效的菌种保藏法之一。
3 材料
3.1 菌株
待保藏的各种菌种。
3.2试剂
2% HCl；牛奶。
3.3器具
安瓿管、标签、长滴管、脱脂棉、干冰、离心机、冷冻真空装置、高频电火花器。
4 流程
备安瓿管→备脱脂乳→制菌悬液→分装→预冻→真空干燥→保藏→活化
5步骤
5.1准备安瓿管
安瓿管先用2%HCl浸泡，再水洗多次，烘干。将标签放入安培管内，管口塞上棉花，灭菌备用。
5.2制备脱脂乳
用鲜奶经处理或使用脱脂奶粉配兑脱脂牛奶，灭菌，并做无菌试验后备用。
5.3制菌悬液
将无菌牛奶直接加到待保藏的菌种斜面内，用接种环将菌种刮下，轻轻搅乱使其均匀地悬浮在牛奶内成悬浮液。
5.4分装
用无菌长滴管将悬浮液分装入安瓿管底部，每支安培管的装量约为0.9毫升。(一般装入量为安瓿管球部体积的1／3)
5.5预冻
将分装好的安瓿管在-25至-40之间的干冰酒精中进行预冻1小时；或在冰箱冷冻室进行预东。
5.6真空干燥
预冻以后，将安瓿管放入真空器中，开动真空泵进行干燥。
5.7封管
封管前将安瓿管装入歧管；真空度抽至0.01毫米汞拄后，再用火焰熔封，封好后，要用高频火花器检查各安瓿管的真空情况。如果管内呈现灰蓝色光，证明保持着真空。检查时高频电火花器应射向安瓿管的上半部。
5.8保藏
做好的安瓿管应放置在低温避光处保藏。
5.9活化
如果要从中取出菌种恢复培养，可先用75%酒精将管的外壁消毒，然后将安瓿管上部在火焰上烧热，再滴几滴无菌水，使管子破裂。在用接种针直接挑取松散的干燥样品，在斜面接种。
6结果
6.1简述真空冷冻干燥保藏菌种的原理。
6.2 记录大肠杆菌斜面作液体石蜡封藏和枯草杆菌作沙土管保藏的要点。
7思考
7.1菌种保藏中，石蜡油的作用是什么？
7.2经常使用的细菌菌株，使用那种保藏方法比较好？
7.3沙土管法适合保藏那一类微生物？
上一篇：实验——微生物菌种常规保藏方法
下一篇：实验——物理因素对微生物的影响
海博微信公众号
海博天猫旗舰店
