实验——化学因素对微生物的影响

1 目的

1.1 了解化学因素对微生物生长的影响

1.2 掌握检测pH值、化学药剂对微生物生长影响的方法

2 原理 

抑制或杀死微生物的化学因素种类极多，用途广泛，性质各异。其中表面消毒剂和化学药剂最为常见。表面消毒剂在极低浓度时，常常表现为对微生物细胞的刺激作用，随着浓度的逐渐增加，就相继出现抑菌和杀菌作用，对一切活细胞都表现活性。化学药剂主要包括一些抗代谢物，例如抗生素等。在微生物实验中，pH值的变化也对微生物生长有很大影响。

3 材料

3.1 菌种

大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、酿酒酵母菌、青霉菌、灰色链霉菌。

3.2 培养基

肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖蛋白胨培养基、豆芽汁葡萄糖培养基、察氏培养基。

3.3 药品

土霉素、新洁尔灭、复方新诺明、汞溴红(红药水)、结晶紫液(紫药水)。

3.4 其他物品

培养皿、无菌圆滤纸片、镊子、无菌水、无菌滴管、水浴锅、振荡器、游标尺、分光光度计。

4 流程

4.1化学药剂对微生物生长的影响

无菌培养皿→配菌悬液→滴加菌样→倒平板→药剂处理→培养→观察结果

4.2不同pH对微生物生长的影响

配培养基→配菌悬液→接种→培养→观察结果 

5 步骤

5.1化学药剂对微生物生长的影响

5.1.1配制菌悬液

取培养18—20h的大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌斜面各1支，分别加入4m1无菌水，用接种环将菌苔轻轻刮下、振荡，制成均匀的菌悬液，菌悬液浓度大约为106cfu/mL。

5.1.2滴加菌样

首先取3个无菌培养皿，每种试验菌一皿，在皿底写明菌名及测试药品名称。然后分别用无菌滴管加菌4滴(或0.2m1)菌液于相应的无菌培养皿中。

5.1.3制含菌平板

将融化并冷却至45—50℃的肉膏蛋白胨培养基倾入皿中约12ml～15m1，迅速与菌液混匀，冷凝备用。

5.1.4化学药剂处理

用镊子取分别浸泡在土霉素、复方新诺明、新诺尔灭、红汞和结晶紫药品溶液中的圆滤纸片各一张，置于同一含菌平板上。

5.1.5培养

片刻后，将平板倒置于37℃温箱中，培养24h。

5.1.6观察结果

观察抑菌圈，并记录抑菌圈的直径。

5.2不同pH对微生物生长的影响

5.2.1配制培养基

肉膏蛋白胨液体培养基（标记A），配制豆芽汁葡萄糖液体培养基（标记B），分别调pH至3、5、7、9和ll，每pH值培养基3管，每管盛培养液5m1，灭菌备用。

5.2.2配置菌悬液

取培养18—20 h的大肠杆菌、酿酒酵母菌斜面各1支，加入无菌水4ml，制成菌悬液。

5.2.3接种与培养

A培养基中接种大肠杆菌液l滴(或0.1毫升)、摇匀，置37℃温箱中培养24h。B培养基接种1滴(或o．1m1)，摇匀，置28℃温箱中培养24h。

5.2.4观察结果

根据菌液的混浊程度判定微生物在不同pH生长情况。

6 思考

6.1上述多个试验中，为什么选用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯革芽孢杆菌作为试验菌?

6.2说明青霉素和链霉素的作用原理。

6.3通过实验说明芽孢的存在对消毒灭菌有什么影响?