实验——酵母菌的形态观察

1目的

1.1 观察啤酒酵母的个体形态及其无性繁殖。

1.2 观察假丝酵母的菌体结构、假菌丝以及繁殖特点。

2 原理

真菌是具有真正细胞核的真核生物，包括酵母菌、霉菌和大型？真菌三大类型。本部分主要介绍如何观察酵母菌的显微形态结构。

酵母菌是单细胞的真核微生物，细胞核和细胞质有明且分化，个体比细菌大得多。酵母菌的形态通常有球状、卵园状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。酵母菌的无性繁殖有芽殖、裂殖和产生掷孢子；酵母菌的有性繁殖形成子囊和子囊孢子。酵母菌母细胞在一系列的芽殖后，如果长大的子细胞与母细胞并不分离，就会形成藕节状的假菌丝。

3 材料

3.1器械

接种针、接种环、酒精灯、载玻片、盖玻片、吸管、显微镜、镊子、恒温培养箱。

3.2培养基与染液

配制麦芽汁培养基、肉汤蛋白胨培养基、孔雀绿染液、0.1？美蓝液、           

3.3菌种

啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），假丝酵母（Candida.spp.）的试管斜面菌种。

4 流程

啤酒酵母镜检→假丝酵母镜检→酵母菌死活细胞镜检→子囊孢子镜检

5 步骤  

5.1 啤酒酵母形态观察

取一洁净载玻片，在载玻片上滴一滴无菌水，用接种环挑取少许啤酒酵母菌苔置于无菌水中，用接种环轻轻划动，使其分散成云雾状薄层；另取一盖玻片，小心覆盖菌液。在显微镜下观察酵母细胞的形状、大小及出芽方式。

5.2 假丝酵母观察

用划线法将假丝酵母接种在麦芽汁平板上，在划线部分加无菌盖玻片，于28—30℃培养3天，取下盖玻片，放到洁净载波片上，在显微镜下观察呈树枝状分枝的假菌丝细胞的形状，或打开皿盖，在显微镜下直接观察。

5.3 酵母菌死活细胞的检查

载片上加一滴0.1％的美蓝，用接种环挑取少许酵母菌苔置于美兰液滴中，用接种环划动，使其分散均匀，加盖玻片，在显微镜下观察，死细胞为兰色，活细胞无色。

5.4 子囊孢子的观察

将啤酒酵母接种于麦芽汁液体培养基中，于28～30℃恒温箱中培养24小时，连续转接培养3～4次；再转接到肉汁蛋白胨培养基中，在25～28℃的恒温箱中培养3天左右，最后经过涂片染色后(按芽孢染色法)，观察子囊孢子形状和特点，以及每个子囊内的孢子数等。

6 结果

把观察到的各种酵母绘图，并注明各部分名称。

7 思考

7.1 在酵母菌死活细胞的观察中，使用美兰液有何作用？

7.2 比较假丝酵母与啤酒酵母形态的异同。