芒果甙对痤疮主要致病菌的抑菌作用研究

【摘要】  目的探讨芒果甙对痤疮主要致病菌的抑菌作用，为深度开发芒果树药用植物资源提供研究依据。方法采用液体试管法，进行金黄色葡萄球菌的常规培养及痤疮丙酸杆菌的厌氧培养，按试管稀释法调整细菌浓度;以红霉素为对照，观察芒果甙对痤疮丙酸杆菌及金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)。结果芒果甙对痤疮主要致病菌有一定的抑菌作用但不如红霉素明显，芒果甙对痤疮丙酸杆菌的MIC为8mmol/L;对金黄色葡萄球菌的MIC为20mmol/L;而红霉素对痤疮丙酸杆菌的MIC为160μmol/L;对金黄色葡萄球菌的MIC为20μmol/L;100μmol/L的芒果甙能把红霉素的MIC浓度从160μmol/L下降至0.160μmol/L。结论芒果甙可降低红霉素的最低抑菌浓度，两者配伍使用，可降低红霉素的使用剂量。

【关键词】  芒果甙;丙酸杆菌，痤疮;葡萄球菌，金黄色;最低抑菌浓度;微生物敏感性试验

　Abstract:ObjectiveTo investigate suppressive effects of Mangiferin on Propionibacterium Acnes in vitro, so as to provide research evidence for further exploiting the drug plant resources of Mango trees.MethodsA fluid test tubemethod was used to perform normal Staphylococcus aureus culture and Staphylococcus aureus anaerobic culture, and the cell concentrations were regulated in tube　dilution series. The erythromycin was used as control, the minimal inhibitory concentration (MIC) of Mangiferin on Propionibacterium Acnes and Staphylocous aureus were observed.ResultsMangiferin can inhibit the Propionibacterium acnes to some extent, but not as sensitive as erythromycin. The MIC of Mangiferin toPropionibacterium acnes is 8 mmol/L and to Staphylocous aureus is 20mmol/L. TheMIC of erythromycin to Propionibacterium acnes is 160 μmol/L and to Staphylocous aureus is 20 μmol/L. The Mangiferin can change the MIC of erythromycin; 100μmol/L of Mangiferin can reduce the MIC of the erythromycin from 160μmol/L to 0.160 μmol/L.ConclusionMangiferin can reduce the MIC of　erythromycin. When combined with erythromycin, it can reduce the dose usage of erythromycin

　　Key words:Mangiferin; Propionibacterium acnes; Staphylococcus aureus; minimal inhibitory concentration (MIC); microbial sensitivity tests

　　痤疮俗称“粉刺”、“青春痘”，是一种由多因素引起的常见慢性毛囊、皮脂腺炎症性皮肤病。有研究[1]表明在痤疮皮损中存在有多种细菌，其中痤疮丙酸杆菌及金黄色葡萄球菌为主要致病菌，在痤疮的不同发展阶段都存在。痤疮丙酸杆菌存在于痤疮发生的多个环节中，它能诱发或加重痤疮症状，用药物减少皮肤毛囊中主要致病菌的数量是目前治疗痤疮的主要途径之一。芒果甙是一种四羟基吡啶的碳糖甙，属双苯吡酮类化合物。有文献报道[2,3]芒果甙具有抗过氧化脂质、抗炎抗菌的作用。笔者用我实验室提取纯化的芒果甙对痤疮丙酸杆菌进行体外抑制试验，现将观察到的结果报道如下。

　　1材料与方法

　　1.1材料

　　1.1.1受试菌株痤疮丙酸杆菌(P.acnes)标准菌株ATCC6919(广东省微生物研究所菌种保藏中心);金黄色葡萄球菌，菌号ATCC29213，卫生部临床检验中心提供。

　　1.1.2试验药物芒果甙为本实验室自行从芒果树叶中提取纯化，按文献[4]进行纯度鉴定，纯度达98%。红霉素购自Sigma公司，货号：E6376。1.1.3仪器及试剂厌氧培养箱YQX-Ⅱ型(上海新苗医疗器械制造有限公司)，光学显微镜为Olympus产品，麦氏比浊管购自温州市康泰生物科技有限公司;痤疮丙酸杆菌培养基：碎肉培养基。其他化学试剂均为国产分析纯。

　　1.2方法

　　1.2.1培养基配方碎肉培养基：蛋白胨30g，K2HPO45.0g，酵母提取物5.0g，L-半胱氨酸盐酸盐0.5g，碎肉提取浸出液1L，碎肉粒200ml，0.025%刃天青4.0ml。肉汤培养基：牛肉浸液(1∶3)1 000ml，蛋白胨10g，氯化钠5g。

　　1.2.2供试验培养基及药液的制备培养基：将培养基pH值调节为7.1～7.2，分装入小试管中，塞子密封，经121℃高压灭菌30min置于冰箱4℃中保存备用。芒果甙药液：称取一定量芒果甙，用2%NaHCO3溶液热溶解成100mmol/L芒果甙母液，经0.22μm微孔滤膜过滤除菌备用;红霉素药液：称取一定量红霉素，用无水乙醇溶液热溶解成1mmol/L母液，经0.22μm微孔滤膜过滤除菌备用。

　　1.2.3菌悬液的制备将P.acnes标准菌株转入碎肉培养基中，放入37℃厌氧培养箱中，厌氧环境增菌48～72h。取次代培养24h的菌液用生理盐水稀释调整为0.5个麦氏比浊单位(约为1.0×108CFU/ml)，同法配制金黄色葡萄球菌悬液，备用。

　　1.2.4镜检观察金黄色葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌均为革兰阳性菌，革兰染色后置于100×100的油镜镜检，镜下见紫色球或杆菌即为有细菌生长。

　　1.2.5药敏试验管的制备采用试管稀释法。芒果甙药液试验管：将芒果甙母液用肉汤培养基稀释成40mmol/L，20mmol/L，10mmol/L，8mmol/L，4mmol/L，2mmol/L，1mmol/L，0.5mmol/L;红霉素药液试验管：将红霉素药液用肉汤培养基稀释成640μmol/L，320μmol/L，160μmol/L，80μmol/L，40μmol/L，20μmol/L，10μmol/L。芒果甙加红霉素药液试验管：将1/1 000上述红霉素梯度浓度，按1∶1的体积比例分别加到20mmol/L，10mmol/L，8mmol/L，4mmol/L，2mmol/L，1mmol/L，0.5mmol/L芒果甙梯度浓度中，置于试管(每管2　　ml)中即成。同时设空白对照管、细菌生长对照管、阳性对照管，每组设4个复管，观察各管细菌生长情况。

　　1.2.6菌悬液的接种用定量加样枪于上述每个药液管中加入新鲜配制的稀释菌液200μl，摇匀，置37℃恒温、厌氧环境中培养72h，观察结果。

　　1.2.7结果判定所有的空白对照管、药物阴性对照管培养基均有细菌生长，说明溶剂对菌　　株生长无影响，对实验结果无干扰。任取两管中少量菌液涂于载玻片中，经革兰染色，镜　　检可见蓝色的微小短棒状杆菌，未见其它杂菌，证明有痤疮丙酸杆菌生长。药物最小稀释管　　中细菌不生长者为该菌对药物的敏感度，按照药液含药量报告。

　　1.2.8结果记录细菌生长浓度按相应的麦氏比浊管号记录，0.5号麦氏比浊管细菌的近似浓度为1×108个/ml，1号麦氏比浊管为3×108个/ml，2号为6×108个/ml，3号为9×108个/ml，4号为12×108个/ml，5号为15×108个/ml。

　　2结果

　　2.1红霉素、芒果甙单独抑菌作用将红霉素肠溶片用液体培养基稀释成640μmol/L，320μmol/L，160μmol/L，80μmol/L，40μmol/L，20μmol/L，10μmol/L，七个梯度，将芒果甙母液用液体培养基稀释成40 mmol/L，20mmol/L，10mmol/L，8mmol/L，4mmol/L，2 mmol/L，1mmol/L，0.5mmol/L八个浓度，观察两种实验药物的最小MIC，结果显示，红霉　　素对痤疮丙酸杆菌的MIC为160μmol/L;对金黄色葡萄球菌的MIC为20μmol/L，芒果甙对痤疮丙酸杆菌的MIC为8mmol/L;对金黄色葡萄球菌的MIC为20mmol/L(见图1、图2)。图1红霉素对痤疮丙酸杆菌及金黄色葡萄球菌的抑制作用图2芒果甙对痤疮丙酸杆菌及金黄色葡萄球菌的抑制作用

　2.2红霉素与芒果甙的协同抑菌作用设置0.640μmol/L，0.320μmol/L，0.160μmol/L，0.080μmol/L，0.040μmol/L，0.020μmol/L及0.010μmol/L七个红霉素低浓度梯度值，与低浓度的芒果甙梯度浓度200μmol/L，100μmol/L，80μmol/L，40μmol/L，20μmol/L，10μmol/L进行相互配伍，观察各配伍方式对痤疮丙酸杆菌及金黄色葡萄球菌的抑制作用，结果显示，0.160μmol/L红霉素与100μmol/L芒果甙即有强烈的协同抑菌作用(见图3，图4)。3红霉素与芒果甙对痤疮丙酸杆菌的协同抑菌作用

　　3讨论

　　3.1痤疮的临床症状、危害及治疗

　　痤疮是皮肤科的常见疾患，传统医学称之为“肺风粉刺”，是一种与性腺内分泌功能失调有关的毛囊、皮脂腺慢性炎症性皮肤病。因其好发于颜面、胸、背等处，形成粉刺、丘疹、脓疱结节或囊肿等损害，严重影响着人的容颜和身心健康。痤疮不仅是一种躯体疾病，其在心理、情绪等方面对患者的影响，不亚于严重的哮喘、癫痫、糖尿病、关节炎等疾病，痤疮患者很容易发生情绪低落，容易焦虑和愤怒，是一种不容忽视的心身疾病，潜在地影响着患者的学习、工作、运动、人际关系和社会生活，使患者生活质量下降。挖掘新药，开辟沟通渠道，实施对痤疮患者的医药治疗和心理社会层面的安抚是医疗工作者的社会责任。一直以来，用抗生素治疗痤疮是临床常见的手法，但随着抗生素的不规范使用甚至滥用，导致细菌对药物的耐药现象越来越严重，急需开发新的治疗方案　　图4红霉素与芒果甙对金黄色葡萄球菌的协同抑菌作用

　　3.2芒果甙治疗痤疮的实验室研究结果及价值分析

芒果甙(亦称木亡果苷)是一种黄酮类化合物，存在于芒果树叶、扁桃叶、石苇、龙胆、知母等多种植物中，具有多重药效作用[2～6]，市场前景广阔，其更多的药效品质值得深入开发与探索。本研究设计采用液体试管法，进行金黄色葡萄球菌的常规培养及痤疮丙酸杆菌的厌氧培养，按试管称释法调整细菌浓度，以红霉素为对照，观察芒果甙对痤疮丙酸杆菌及金黄色葡萄球菌的MIC。实验结果显示，芒果甙对痤疮主要致病菌有一定的抑菌作用但不如红霉素明显，芒果甙对痤疮丙酸杆菌的MIC为8mmol/L;对金黄色葡萄球菌的MIC为20mmol/L;而红霉素对痤疮丙酸杆菌的MIC为160μmol/L;对黄色葡萄球菌的MIC为20μmol/L;100μmol/L的芒果甙能把红霉素对痤疮丙酸杆菌的MIC浓度从160μmol/L下降至0.160μmol/L。芒果甙与红霉素配合使用时，可起到“药引”性作用，100μmol/L芒果甙可使红霉素对痤疮丙酸杆菌最低抑菌浓度从160μmol/L降至0.160μmol/L，降低了红霉素的使用量，据此有望成为红霉素的新药引之一。

作者：叶海洪，农朝赞，黄婵娟，黄之虎，潘莉莉 农少云，韦仕喻，郭凌霄，吴玉清

  　[1]张佳君，张晓东,刘四海.痤疮丙酸杆菌对中药痤疮饮敏感性的探讨[J].中药药理与临床,2010,26(1):68-70.

　　[2]谭安雄,钱凤,朱耀斌,等.芒果苷对易卒中型自发性高血压大鼠脑缺血再灌注后炎性因子的影响[J].中华高血压杂志,2010,18(4):380-384.

　　[3]李学坚,邓家刚,覃振林,等.芒果苷、小檗碱组合物抑菌、抗炎、镇痛作用的研究[J].中国中医药科技,2010,17(1):36-37.

　　[4]周志勇,袁丁,黄鹤飞.天然产物抗单纯疱疹病毒的研究进展[J].中国药房,2010,21(3):383-385.

　　[5]姚奕斌,彭志刚,刘振芳,等.芒果苷对白血病HL-60细胞周期及CDC2/CyclinB1表达的影响[J].中药材,2010,33(1):81-85.

[6]林周孟,何春拉,孟晓静.芒果甙抗肿瘤作用研究进展[J].实用医学杂志,2009,25(4):663-664.