实验室常用贮存液的配制参数(下)

16.IPTG溶液

 

【配制方法】IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量为238.3)，在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。

 

17.1mol/L乙酸镁溶液

 

【配制方法】在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L过滤除菌。

 

18.1mol/L MgCl2溶液

 

【配制方法】在800ml水中溶解203.4g MgCl2?6H2O，用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。

 

【注意】MgCl2极易潮解，应选购小瓶(如100g)试剂，启用新瓶后勿长期存放。

 

19.β-巯基乙醇(BME)溶液

 

【配制方法】一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4℃。

 

【注意】BME或含有BME的溶液不能高压处理。

 

20.NBT溶液

 

【配制方法】把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃。

 

21.酚/氯仿溶液

 

【配制方法】把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris?HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/l Tris?HCl(pH7.6)液层，保存于4℃。

 

【注意】酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

 

22.10mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)溶液

 

【配制方法】用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml(10mmol/L)，分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液(100mmol/L)。

 

【注意】PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节　为碱性(pH>8.6)并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。

 

23.磷酸盐缓冲溶液(PBS)溶液

 

【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl调节　溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。

 

24.1mol/L乙酸钾(pH7.5)溶液

 

【配制方法】将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中，用2mol/L乙酸调节　pH值至7.5后加入纯水定容到1L，保存于-20℃。

 

25.乙酸钾溶液(用于碱裂解)

 

【配制方法】在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。

 

26.3mol/L乙酸钠(pH5.2和pH7.0)溶液

 

【配制方法】在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节　pH值至5.2或用稀乙酸调节　pH值至7.0，加水定容到1L，分装后高压灭菌。

 

27.5mol/L NaCl溶液

 

【配制方法】在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L，分装后高压灭菌。

 

28.10%十二烷基硫酸钠(SDS)溶液

 

【配制方法】在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节　溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。

 

【注意】SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10%SDS溶液无须灭菌。

 

29.20×SSC溶液

 

【配制方法】在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/l NaOH溶液调节　pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。

 

30.20×SSPE溶液

 

【配制方法】在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4?H2O和7.4g EDTA，用NaOH溶液调节　pH值至7.4(约需6.5ml 10ml/L NaOH)，加水定容至1L，分装后高压灭菌。

 

31.100%三氯乙酸溶液

 

【配制方法】在装有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%(M/V)TCA。

 

32.1mol/L Tris溶液

 

【配制方法】在800ml水中溶解121.91g Tris碱，加入浓HCl调节　pH值至所需值。应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1L，分装后高压灭菌。

 

【注意】如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。

 

尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1℃，pH值大约降低0.03个单位。例如：0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。

 

33.Tris缓冲盐溶液(TBS)(25mmol/l Tris)

 

【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱，加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4，用蒸馏水定容至1L，分装后在151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min，于室温保存。

 

34.X-gal溶液

 

【配制方法】X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于-20℃。X-gal溶液无须过滤除菌