乳粉中阪崎肠杆菌的检测方法（1）

 

摘  要：为乳品企业开展阪崎肠杆菌出厂检验寻找更加便捷、准确，且检测费用低廉的检测方法。参照SN/T1632.1-2005标准，在定性检测基础上有所改进。选择3 种基础肠道分离培养基伊红美蓝、麦康凯、山梨醇麦康凯分离培养及生化鉴定阪崎肠杆菌．对两种修复培养基灵敏度进行比较及阪崎肠杆菌在5种肠道分离培养基上生长情况比较。结果表明, A和B 两组修复培养对婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌均能起到修复作用，B组使用BP修复培养比A组蒸馏水修复培养灵敏度 高出1个稀释度 (10倍)。阪崎肠杆菌在5种肠道分离培养基上均能生长。选择 上述3种基础肠道分离培养基分离鉴定阪崎肠杆菌，费用低廉．用于乳品企业对每批次产品进行自检．有更大的经济效益和社会效益。

 

0  引  言

2003年1月9日．美国美赞臣公司向美国食品及药品管理局(FDA)报告要求回收在美国生产的一批罐装早产儿特殊配方乳粉．回收原因是在该批产品中检验出极微量的阪崎肠杆 菌(Enterobacter sakazakii)。此后，“问题乳粉”事件迅速引起世界广泛关注．污染源阪崎肠杆菌也成为焦点目标^［3］

 

美国食品及药品管理局(FDA)于2002年提出在婴幼儿配方乳粉中检测阪崎肠菌．随着 对阪崎肠杆菌检测的重视．国家质量监督检验检疫总局要求企业生产的每批次婴幼儿配方乳粉出厂前都要求进行自检，做到对阪崎肠杆菌检测工作日常化。本文参照SN／T1632．1 - -20 05标准定性检测的基础上有所改进。目的是为进一步推动乳品企业对每批次产品进行阪崎 肠杆菌出厂检验而寻求更加便捷、准确，且检测费用低廉的检测方法。

 

( 1) 菌种来源。阪崎肠杆菌0624标准菌株，由广东省临床检验中心提供阪崎肠杆菌0 819- -041、0814- 178由本中心分离 。

( 2 ) 培养基。缓冲蛋白胨水(BP)、肠道菌增菌肉汤 (EE)、伊红美蓝(EMB)、麦康凯( Ma cConKey)、山梨醇麦康凯 (SorbitolMacConKey)，营养琼脂(NutirentA—gar)为杭州天和微生 物试剂有限公司生产。肠道计数培养基(VRBGA)，显色培养基(Xa—GicA )由北京陆桥公司 生产

( 3) 微量生化管。杭州天和微生物试剂有限公司生产，部分为自配。所用培养基经实验室生物学质控考核，符合微生物生长需要。

 

1．2．1 样品修复培养

无菌称取100 g乳粉加入500 ml预热45℃缓冲蛋白胨水中．混匀，经36℃±1℃培养 18～24h。 

1．2．2 肠道增茵肉汤培养

移取10 mL加入90 mL EE肉汤中，于36℃±1℃培养18 - 24 h。 

1．2．3分离培养

取EE肉汤培养物1环．分别划线接种EMB，MacConKey，SorbitolMacConKey琼脂平板各1块．置36℃±1℃ 培养18 ~24h．挑取可疑菌落分纯培养。

1．2．4两种修复培养及培养基

( 1 )取2～8℃冰箱已保存3个月的阪崎肠杆菌斜面用无菌生理盐水制备菌悬液．从10^-1～10^-9作连续10倍稀释．同时取10^-9～10^-10。lmL涂布平板各2块，36℃±1℃培养过夜， 菌落计数。

(2)取上述菌悬液从10^-9一10^-1分别取0．1mL加入A组：9mL质量分数为10％婴儿乳粉蒸馏水管中；B组：9 mL质量分数10％婴儿乳粉BP培养液中：置36℃± 1 ℃培养1 8～24h

( 3) 取上述A和B培养液9 mL移入90 m的EE肉汤中，于36℃±1℃培养18～24 h， 划线接种EMB，Mac—ConKey．Sorbitol NlacConKey．VRBGA Xa—GicA琼脂平板，36℃±1℃培养18~24 h，观察结果并记录(实验重复3次)。

1．2．5  在5种分离培养基上情况比较

(1) 取18 - -24 h培养的阪崎肠杆菌新鲜斜面制备菌悬液。 

(2)用无菌生理盐水从10^-1 ～10^-9 作连续10倍稀释，取10^-4，10^-5，10^-6分别取0．1ml涂布2％Nutirent Agar，EM B，MacConKey，SorbitolMacConKey，VRJBGA．Xa—GicA琼 脂平板．于36℃±1℃培养18 - -24 h，进行比较(实验重复3次) 。