中文版  |   English  |   加入收藏  |   客服热线:400-0532-596
微生物技术资料
文章检索
  首页 > 微生物知识->细菌基本知识和检测方法->MPN法测定硝化细菌数量

MPN法测定硝化细菌数量



录入时间:2011-4-27 10:01:17 来源:青岛海博

硝化作用是指氨经过微生物的作用氧化成亚硝酸和硝酸的过程。它是由两类细菌分两个阶段完成的。第一阶段是氨氧化为亚硝酸,由亚硝化菌完成;第二阶段是由亚硝酸氧化为硝酸,由硝化菌完成。所以测定时需要测定亚硝酸菌和硝酸菌数量
1材料与方法
1.1实验用材
 
砂粒样品:
实验样品来自实验一不同高度取出的滤料,测砂子上硝化细菌:取1g砂子在无菌水中振荡多长时间?
培养基:
改良的斯蒂芬逊(Stephenson)培养基A、B
 
A
(NH4)2SO4        2.0g             
NaH2PO4         0.25g
MnSO4·4H2O      0.01g
MgSO4·7H2O      0.03g
K2HPO4          0.75g
CaCO3           5.0g
蒸馏水           1000ml
PH               7.2
 
B
NaH2PO4         0.25g
K2HPO4          0.75g
MgSO4·4H2O      0.03g
MnSO4           0.01g
CaCO3            1.0g
Na2CO3           1.0g
NaNO3                 1.0g
蒸馏水            1000ml
PH                7.2
 
 
121℃灭菌         30min
 
器材:
无菌吸管、试管(1.8cm×18cm)、白瓷比色板、接种环、酒精灯等。
 
格里斯试剂(Griess Reagent)第一、第二液
第一液:将0.5g的对氨基苯磺酸(Sulfanilic Acid)加到150ml的20%稀醋酸溶液中。
第二液:将1gα-萘胺(α-naphthylamine)加到20ml蒸馏水和150ml的20%稀醋酸溶液中。
 
二苯胺试剂:溶0.5g无色的二苯胺(Diphenylamine)于20ml蒸馏水及100ml浓硫酸(相对密度1.84)中即成。
 
1.2实验方法:
1.2.1亚硝酸菌测定:将培养基A分装于试管中,每管5ml,每个样品需培养基19支试管。砂粒悬液采取10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7六个稀释度。在每个培养基中,用无菌吸管接种砂粒悬液1ml。每个稀释度重复3管,另取一管培养基接种1ml无菌水作为对照。于25~28℃培养。10~14d后,取出培养液5滴于白瓷比色板上,加入格里斯试剂(Griess Reagent)第一、第二液各两滴,如有亚硝酸盐存在,则呈红色。从《三次重复数量指标》表中求的数量指标后,换算成每克干砂粒的亚硝化细菌数量。
 
1.2.2硝酸菌测定:将培养基B分装于试管中,每管5ml,每个样品需培养基16支试管。砂粒悬液采取10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、五个稀释度。在每个培养基中,用无菌吸管接种砂粒悬液1ml。每个稀释度重复3管,另取一管培养基接种1ml无菌水作为对照。于25~28℃培养。10~14d后测定硝酸的产生,取出培养液5滴于白瓷比色板上,加入格里斯试剂(Griess Reagent)第一、第二液各两滴,如不呈红色,表示亚硝酸均已经完全消失。此时,另取培养液5滴于白瓷比色板上,加二苯胺试剂2滴,如呈蓝色,则表示亚硝酸已经被氧化成硝酸,说明有硝酸细菌的存在。从《三次重复数量指标》表中求的数量指标后,换算成每克干砂粒的亚硝化细菌数量。
 
1.2.3《三次重复数量指标》(略)

 

上一篇:乳粉中阪崎肠杆菌的检测方法(2)

下一篇:大肠菌群MPN的概念及意义

相关文章:
大肠菌群MPN计数法的两步发酵及讨论 微生物检测项目常用计量单位CFU与MPN的差异
Campy-Cefex琼脂基础的原理和使用方法 改良Camp-BAP氏琼脂基础的原理及使用方法
MPC琼脂培养基原理和使用方法 改良马铃薯葡萄糖琼脂(mPDA)培养基原理及现象
TMP琼脂培养基原理及现象 闪烁杆菌属(FervidobacteriumPatel et al,1985)
双芽孢杆菌属(Amphi加cillusNijmura et al., 1990) 脱硫肠状菌属(Desulfotomaculum Campbell & Postgate, 1965)
首页 | 关于我们 | 网上商城 | 在线客服 | 联系我们
业务联系电话
   400-0532-596 0532-66087773
   0532-66087762 0532-81935169
邮箱:qdhbywg@vip.126.com
地址:青岛市城阳区锦汇路1号A2栋
产品技术咨询
  工作日(周一至周六8:00-18:00):
  18562658263 13176865511
  其它时段:13105190021
投诉与建议:13105190021 13006536294