微生物检验基本知识

包括显微镜检、染色技术、培养基制备技术、接种、分离纯化和培养技术等

一、接种(inoculation)

将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。

1. 接种工具  接种针 接种环 接种钩 玻璃涂棒 接种圈 接种锄小解剖刀

2. 常用的接种方法      有以下几种：

1)划线接种   最常用。常用的接种工具有接种环，接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。

2)三点接种   在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。

3)穿刺接种   在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常用。用的接种工具是接种针。培养基一般是半固体培养基

4)倾注接种   该法是将待接种微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45°C左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，以达到稀释菌液的目的。待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。

5)涂布接种   先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，使菌液均匀分布，即可长出单个菌落。

6)液体接种   从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中；或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，都属于液体接种。

7)注射接种   用注射的方法将微生物转接至活的生物体内，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种。

8)活体接种   是专用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法。所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。接种的方式有注射、灌喂、拌料喂养等。

3. 无菌操作(Aseptic technique)

培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具(如接种针和吸管等)在无菌条件下接种含菌材料(如样品、菌苔或菌悬液等)于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。      在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。

二、分离纯化(Isolation)

含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物(Mixed culture)。如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养(Pure culture)。

在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化，方法有许多种。

1、倾注平板法( Pour plate )                 2、涂布平板法(Spread plate)

3、平板划线法(Streak plate)

常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。

4、富集培养法

富集培养法的方法和原理非常简单。我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其它微生物。如果要分离一些专性寄生菌，就必须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中，使其大量生长。通过多次重复移种便可以得到纯的寄生菌。

5、厌氧法

在实验室中，为了分离某些厌氧菌，可以利用装有原培养基的试管作为培养容器，把它放在沸水浴中加热数分钟，以便逐出溶解氧。然后快速冷却，并进行接种。接种后，加入无菌石蜡于培养基表面，使与空气隔绝。另一种方法是，在接种后，利用N2或CO2取代培养基中的气体，然后在火焰上把试管口密封。

有时为了更有效地分离某些厌氧菌，可以把所分离样品接种于培养基上，然后再把培养皿放在完全密封的厌氧培养装置中。

三、培养

1、根据培养时是否需要氧气，可分为好氧培养和厌氧培养。

好氧培养(Aerobic Incubation) ：也称“好气培养”。   厌氧培养(Anaerobic Incubation)：也称“厌气培养”。

2、根据培养基的物理状态，可分为固体培养和液体培养两大类：固体培养：solid incubation 液体培养：liquid incubation