空肠弯曲菌及其检验

空肠弯曲菌及其检验
Examination of Campylobacter jejuni

空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是弯曲菌属( Campylobacter )的一个种。首次分离：1972年，比利时Butzler等，腹泻病人粪便。主要引起：人及动物急性腹泻；集体食物中毒。与人类有关的：空肠弯曲菌、胎儿弯曲菌及小肠弯曲菌，其中以空肠弯曲菌致病最多。

流行病学特征

家畜、家禽肠道正常菌群

传染源：病人，带菌者 ，带菌动物

传播途径：动物→人: 密切接触、粪口传播； 人 → 人 : 粪口传播

人群易感性：人群普遍易感；1～5岁儿童发病率最高

一、生物学特性

1. 形态染色特性

革兰氏阴性无芽孢杆菌，呈弧形、螺旋形或S形，大小约为1.5～5×0.2～0.5μm。有一根端鞭毛，长度约为菌体的2～3倍。有荚膜。有动力，新鲜培养物在相差或暗视野显微镜下可看到细菌呈跳跃或射标样运动。在陈旧培养物中或培养环境变碱时形态易变为球形并丧失动力。

2. 培养特性

需微需氧环境才能生长，最适气体条件是N₂、CO₂、O₂含量比为85: 10:5。最适温度42℃，最适pH为7.2。本菌对营养要求较高，在一般的肠道菌分离培养基中不能生长，只有在含有血液、血清、营养丰富的培养基上才能生长良好，可见无色半透明毛玻璃样小菌落，单个菌落呈中心凸起，周边不规则，无溶血现象。在TTC培养基上菌苔呈紫色光泽。

3. 生化特性

生化反应不活泼。不发酵糖类；不液化明胶；MR和V-P试验均为阴性；氧化酶阳性；触酶阳性；不产生硫化氢；尿素酶阴性；在3.5%NaCl环境中不生长，1%甘氨酸中和马尿酸钠培养基中生长，煌绿(1: 10^-5)中不生长；除个别菌株外，均无色素产生。

4. 血清学特性

本菌抗原构造与肠道杆菌一样具有O、H和K抗原。根据O抗原，可把空肠弯曲菌分成45个以上血清型，第11、12和18血清型最为常见。

二、检验

一)样品的的收集与处理

二)常规检验方法(GB/T 4789.9-2003)

1、微需氧条件的准备       2、分离与初步鉴定      3、确定鉴定

4、生物分型 ：1)快速马尿酸钠水解试验；2)快速硫化氢试验；3)DNA酶水解试验。

5、血清学鉴定：1)间接血凝分型法；2)Lior玻片凝集法。

三)其它检验方法

1、微需氧条件的准备       换气法    气袋法    烛缸法   双平板法

2、分离与初步鉴定     分离：改良Camp-BAP，Skirrow氏培养基。

第一型菌落：不溶血，灰色、扁平、湿润、有光泽，露滴状，有沿接种线扩散的倾向。

第二型菌落：不溶血，常呈分散凸起的单个菌落(1mm～2mm)，边缘完整、发亮。

初步鉴定：  氧化酶阳性，触酶阳性         Gram’s染色         暗视野或相差显微镜观察动力

3、确定鉴定

甘氨酸耐受性试验:生长，＋ ;  硫化氢试验:－ ;  3.5%NaCl耐受性 :－;  42℃和25 ℃生长试验:42℃＋，25 ℃－;

马尿酸钠水解试验 :＋;  萘啶酸试验 :敏感;   TTC试验 :紫色菌苔;     硝酸盐还原试验 :＋

4、生物分型

空肠弯曲菌生物型

               

5、血清学鉴定：

1)间接血凝分型法：O因子血清分型        2)Lior玻片凝集法：H或K因子分型