金黄色葡萄球菌及其检验

金黄色葡萄球菌及其检验
Examination of Staphylococcus aureus

葡萄球菌(Staphylococcus)是引起人类和动物化脓性感染的最重要病原菌，可引起人类丘疹、疖、脓肿、骨髓炎和脑膜炎以及奶牛的乳房炎，又是引起人类食物中毒的最常见细菌之一。

 

葡萄球菌包括金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) 、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌。

 

引起食物中毒的主要是金黄色葡萄球菌，致病因素是其在食品中繁殖后产生的肠毒素(enterotoxin)，故属于毒素型中毒。

 

中毒的原因食品主要是乳类、肉类、鱼类及含淀粉高的食物(如剩米饭等)，特别是经过加热处理的食品。

 

Staphylococcus is a very well known genus of bacteria. Colonies are "gold," or yellow on sheep blood agar solid media, hence the name. A common pathogen, boils, acne, wound infections, food poisoning are among a host of conditions caused by this organism.

 

The organism is both pathogenic and invasive. It produces leukotoxin which can kill white blood cells and a wide variety of other toxins.

 

S. aureus is quite pyogenic and in decades past was named Staphylococcus pyogenes.

 

The 'superbug' MRSA (methicillin-resistant Staphylococcus aureus) :MRSA is resistant to the majority of antibiotics commonly used in hospitals and there are fears that it might acquire resistance to the remaining effective antibiotic. The number of cases in the UKhas grown 600% in eight years.

一、金黄色葡萄球菌

葡萄球菌不同菌株在固体培养基产生不同的颜色，从而分为金黄色葡萄球菌，白色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌。

一)生物学特性

1. 形态染色特性

革兰氏阳性球菌，直径0.4～1.2µm，致病性菌株形态较小，呈葡萄串状排列。无芽孢，无鞭毛，一般不形成荚膜。

2. 培养特性

兼性厌氧，在普通培养基上生长良好。金黄色葡萄球菌通常产生金黄色色素，多数溶血。在普通肉汤中培养24h后，均匀浑浊生长；2～3天后可形成菌膜；老龄培养物管底可有粘稠沉淀物。耐盐性强,在含10％ ～15％氯化钠培养基中亦能生长。  普通琼脂上：圆形、凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润、不透明的中等大小菌落，直径一般为1～ 2mm。Baird-Parker氏琼脂上：菌落为圆形、光滑、凸起、湿润，直径为2～3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘色淡，周围为一浑浊带，其外层有一透明带。

3. 生化特性

本菌大多数能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。不产生靛基质，能还原硝酸盐，可凝固牛乳，MR试验阳性，V-P试验不定。多数致病性菌株过氧化氢酶和血浆凝固酶阳性，产生金黄色色素，发酵甘露醇产酸不产气。

4. 血清学特性

葡萄球菌有蛋白质抗原和多糖类抗原。蛋白质抗原为完全抗原，有种属特异性，无型别特异性；存在于葡萄球菌表面，是细胞壁的成分，称为葡萄球菌A蛋白(Staphylococcus protein A，SPA)。SPA可与IgG的Fc片段结合，因而可用含SPA的葡萄球菌作为载体，结合特异性抗体，进行协同凝集试验等，作为快速的诊断方法。  多糖类抗原为半抗原，有型特异性，可用来对葡萄球菌进行分型。

二)葡萄球菌肠毒素

金黄色葡萄球菌除具有以上特性外，在生长繁殖过程中还产生很多毒素和酶，其中主要有溶血毒素、肠毒素、杀白细胞素、血浆凝固酶、DNA酶、耐热性核酸酶和透明质酸酶等。葡萄球菌肠毒素(enterotoxin)是一种多肽单链结构的可溶性蛋白质，目前已发现的有A、B、C1、C2、C3、D、E、F共8个型，引起中毒的以A型最多。金黄色葡萄球菌产生肠毒素的适宜条件是含淀粉和水分较多的食品，并要求一定的温度、pH等。在20～37C下经4－8h即可产生毒素。 葡萄球菌肠毒素耐热，一般烹饪温度不能将其破坏，经100℃煮沸30min不被破坏，100℃60min仍保持部分活性。也不受胰蛋白酶的影响。误食污染肠毒素的食物后，在肠道作用于内脂神经受体，传入中枢，刺激呕吐中枢，引起呕吐，并产生急性胃肠炎症状。发病急，病程短，恢复快。一般潜伏期为1～6h，最短者0.5h，出现头晕、呕吐、腹泻，发病1～2日可自行恢复，预后良好。

 

 

二、葡萄球菌检验

一)常规检验       参见：《动物性食品检验学》河南农业大学主编第五章第三节 P59

取检样进行增菌和分离培养，观察溶血情况，然后挑取可疑菌落做涂片镜检，并进行血浆凝固酶试验。凡形态和菌落特征典型，溶血，血浆凝固酶阳性，即可报告为金黄色葡萄球菌。

二)葡萄球菌致病因子测定

血浆凝固酶试验、耐热核酸酶试验、酸性磷酸酶试验、钼酸铵还原试验和肠毒素检测等。

1、血浆凝固酶实验    致病性菌株血浆凝固酶一般为阳性。检验方法有玻片法、试管法和微管法

2、耐热核酸酶试验    近年来发现金黄色葡萄球菌产生的核酸酶能耐受煮沸而不被破坏，且其最适pH为9.0，这些特点与其它细菌不同，可作为鉴定方法之一。

3M快速金黄色葡萄球菌数测试片：金黄色葡萄球菌呈红色或蓝色菌落，耐热核酸酶环带显示粉红色。

3、酸性磷酸酶试验 致病性葡萄球菌具有酸性磷酸酶，可将吲哚磷酸盐水解为蓝绿色靛蓝。而非致病性菌株不具有此酶，基质不变，仍为无色。

4、毒素测定 从食品检样中提取和检测肠毒素采用浓缩法层析法和ELISA法。