溶血性链球菌及其检验

溶血性链球菌及其检验
Examination of Streptococcus hemolyticus

一、溶血性链球菌

链球菌属(Streptococcus)是一个古老的属，按溶血性有甲、乙、丙3型，用兰氏血清学分类法可将其分为从A、B、C、D、E、F、G、H、K、L、M、N、O、P、Q、R、S、T、U、V共20个血清群。1974年以后，又从中分出了肠球菌属、乳球菌属和游走球菌属，因此原来的链球菌属分成了几个属。链球菌在自然界分布广泛，是食物污染的重要原因。文献报导，许多由食物引起的脓毒性咽喉痛和猩红热，是由A群链球菌引起，近年来，由链球菌引起的食物中毒已逐渐为人们所注意。链球菌性食物中毒，经常由乳、肉类食品所引起，多为α溶血型。β溶血型链球菌引起食物中毒较少。溶血性链球菌可引起皮肤化脓性感染、乳房炎、败血症等多种疾病；可通过多种途径污染乳、乳制品和肉类制品，并大量增殖而引起食物中毒。

 

The beta-hemolytic streptococci are further divided into groups based on their Lancefield antigen.  This is a cell wall carbohydrate that is characteristic of that particular Group of b-hemolytic streptococci.

 

The only exception is the former Group D streptococci (now a separate genus: Enterococcus) that have glycerol teichoic acid as their Lancefield antigen.

 

Among the beta-hemolytic streptococci, Streptococcus pyogenes is the most virulent for humans.

一)生物学特性

1、形态染色特性

革兰氏阳性，圆形或卵圆形，直径0.5～ 1μm，成双或呈链状排列。链的长短与细菌种类及生长环境有关，在液体培养基中易形成长链，固体培养基上常成短链，致病性链球菌一般链较长。不形成芽孢，无鞭毛，不能运动。少数菌株在血清肉汤幼龄培养物中可形成微荚膜，但延长时间后即消失。

2、培养特性

1)需氧或兼性厌氧。生长温度20～42℃，最适温度37℃。最适pH为7.4～7.6。

2)多数致病性菌株的营养要求较高，在普通培养基上生长不良，必须加血液、血清、腹水等。

3)血琼脂平板：灰白色、半透明或不透明、表面光滑、有乳光、直径0.5～0.75mm、圆形凸起的细小菌落。不同菌株溶血情况不同：甲型(α型)、乙型(β型)、丙型(γ型)溶血。

4)血清肉汤：呈颗粒状生长，大多沉于管底，肉汤不太浑浊。溶血性链球菌形成的链较长，呈典型的絮状或颗粒状生长，或粘附于管壁上。不溶血菌株链较短，肉汤均匀浑浊。

Streptococci are Gram-positive cocci that grow in chains or pairs. Cell division occurs in a single plane resulting in chains. Streptococci are catalase negative. This is used to distinguish Streptococcus species from Staphylococcus species. facultative organisms. Streptococci are auxotrophic, and need to be cultured on enriched media to grow.  Streptococci are typically grouped by hemolysis on blood agar plates: Alpha hemolysis occurs when the RBCs are intact, but hemoglobin is converted to biliverdin .  This causes a greening of the plate. Beta hemolysis is true hemolysis due to the actions of a hemolysin, an erythrocyte lysing enzyme.  The plate becomes clear where the blood cells have been lysed.  Gamma hemolysis is actually no hemolysis.

3、生化特性

对常用的糖类，发酵后产酸不产气。分解葡萄糖后产生乳酸和少量甲酸、醋酸与乙醇。对乳糖、甘露醇、水杨苷的发酵能力因菌株不同而异；链球菌一敏不分解菊糖，不被胆汁及10％胆盐所溶解，这点可用来鉴别链球菌和肺炎双球菌。

肠球菌可在6.5％氯化钠葡萄糖肉汤、40％胆汁肉汤，pH9.6葡萄糖肉汤和0.1％美兰牛乳培养基中生长，能在10℃和45℃下生长。这几点可作为肠球菌和其他链球菌的鉴别。人类溶血性链球菌可分解蕈糖，山梨醇阴性；动物溶血性链球菌则相反。

4．抗原构造

1)核蛋白抗原或称P抗原：无群型特异性，各种链球菌均同，与葡萄球菌有交叉，不能用于分类。

2)多糖抗原或称C抗原(群特异性抗原)：具有群特异性，是细菌壁的多糖成份。据此可将链球菌分为20个血清群。对人致病的90%属于A群，其次为B群。

3)型特异性抗原(M抗原) ：又称蛋白质抗原或称表面抗原，是链球菌细胞壁的蛋白质成分，位于多糖抗原之外；具有型特异性，基于M蛋白抗原性的不同，可将A群链球菌区分为100多个不同的血清型。

二)链球菌感染

致病性链球菌可产生多种酶和外毒素，如溶血素、红疹毒素、链道酶(DNA酶)、链激酶(溶纤维蛋白酶)、致死毒素、杀白细胞素、透明质酸酶、蛋白酶等。感染人类的主要是： A群(化脓链球菌，S. pyeogenes)～90％， B群(无乳链球菌，S. agalactiae)， 肺炎链球菌(S. pneumoniae )。引起猪病并偶尔经伤口感染人的链球菌主要有：D群的肠球菌,  R群的猪链球菌2型，F群的咽唊炎链球菌， L、S、T、U、V群链球菌等。

二  检验

一)常规检验    GB/T 4789.11-2003

主要包括如下步骤：1、增菌培养； 2、分离培养； 3、生化试验： 1)链激酶试验；2)杆菌肽敏感试验；3)马尿酸钠水解试验；4)淀粉水解试验；5)明胶液化             二)动物试验

三)血清学试验：分群鉴定；分型鉴定。

1)链激酶试验：吸取健康人血浆0.2mL(草酸钾0.01g，加入5mL人血混匀，离心后取上清即为血浆)，加入0.8mL生理盐水，混匀，再加18～24h链球菌肉汤培养物0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL，振荡混匀。置37℃水浴中，每隔几分钟观察1次，血浆凝固(约10min)后，注意观察及记录溶化的时间。强阳性者可在20min内完全溶化凝固的血浆；24h仍不溶化者为阴性。

2)杆菌肽敏感试验：挑取乙型溶血性链球菌浓菌液，涂布于血平板上，用灭菌镊子夹取每片含有0.04单位的杆菌肽纸片，放于上述平板上，于37℃培养18～24小时，如有抑菌带出现即为阳性，可初步鉴定为A群链球菌。同时用已知阳性菌株作为对照。

根据溶血性，可把链球菌分为

(1)甲型溶血性链球菌(α-Hemolytic streptococcus)：菌落周围有1～2mm宽的草绿溶血环，称甲型溶血或α溶血。亦称草绿色链球菌(Streptococcus viridans)。为条件致病菌

(2)乙型溶血性链球菌(β-Hemolytic streptococcus)：菌落周围形成一个2～4mm宽，界限分明、完全透明的溶血环，完全溶血，称乙型溶血或β溶血。又称溶血性链球菌(Streptoccus hemolyticus)。致病力强，引起多种疾病。

(3)丙型链球菌(γ-Streptococcus)：不产生溶血素，菌落周围无溶血环，故又称不溶血性链球菌(Streptococcus non-hemolytics)。一般不致病。