假单孢菌属检验

假单孢菌属检验
 Pseudomonos

一、假单胞菌属(Pseudomonos)

假单胞菌属(Pseudomonos)为革兰氏染色阴性的直或微弯曲杆菌，大多有鞭毛(鼻疽杆菌无鞭毛)，无芽孢和荚膜，非抗酸性，严格需氧。个别种能利用反硝化作用进行厌氧呼吸。DNA的G+C含量在50～70mol%。该属细菌约有140多种，其中已发现对人和动物有重要意义的20多种。鼻疽杆菌、类鼻疽杆菌等为致病菌。该属细菌中对人和动物有重要意义的20多种。鼻疽杆菌、类鼻疽杆菌等为致病菌。食品中污染的假单胞菌最常见的有铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、腐败假单胞菌及嗜麦芽假单胞菌等。椰毒假单胞菌可引起人的食物中毒。假单胞菌属广泛分布在土壤、淡水和海水环境中，污染肉类、鱼类及其它食品，在适当条件下大量繁殖，造成这些食品腐败变质，引起食物型的肠道症状。

二、铜绿假单胞菌(Ps. aureginosa)

(一)生物学特性

－形态染色特性

铜绿假单胞菌又称为绿脓杆菌，是土壤中最普遍存在的细菌之一。本菌为革兰氏阴性杆菌，大小为1.5～3.0×0.5um，在菌体一端有一根鞭毛，能运动，不形成芽孢和荚膜。有菌毛，可传递质粒耐药因子(R因子)。菌体长短不一，有的为球杆状，有的呈长丝状。单个、成对排列，或形成短链。

－培养特性

专性需氧。生长温度范围20～42℃，最适温度35℃。致病性菌株在42℃生长，但不在4℃生长，籍此可与荧光假单胞菌鉴别。对营养无特殊要求，在普通培养基上生长良好，在选择培养基如麦康凯琼脂、SS琼脂上也能生长。普通琼脂：形成圆形、边缘不整齐、扁平稍隆起、光滑湿润且常呈融合状态的菌落，能产生水融性色素而使琼脂被染成蓝绿或黄绿色。血平板：菌落大而扁平，湿润，有金属光泽，有特殊气味，颜色灰绿或蓝绿，菌落周围形成透明溶血环。普通肉汤：可在液面形成菌膜，肉汤稍混浊或透明，上部为蓝绿色，振荡后菌膜易乳化，色素均匀分布。绿脓杆菌可产生多种色素，主要是绿脓素(为绿脓杆菌所特有)。此为无荧光的吩嗪类色素，蓝绿色，水溶性，并能溶于氯仿。此外，还可产生青脓素(即荧光色素)、红脓素(水溶性的红色色素)、黑脓素(棕黑色水溶性色素)等。但个别菌株不产生色素。

－生化特性

能氧化分解葡萄糖、木糖，产酸不产气；氧化酶阳性；能液化明胶；分解尿素；能利用枸橼酸盐；不产生吲哚；能还原硝酸盐为亚硝酸盐，或产生氮气。

－抗原特性

本细菌有O抗原、H抗原和被膜抗原。其中O抗原有两种成分，即绿脓杆菌内毒素和原内毒素蛋白质(OEP)，前者成分中脂多糖(LPS)是型特异性抗原，为绿脓杆菌重要的致病因子；OEP是保护性抗原，广泛存在于假单胞菌属其它细菌和多种革兰氏阴性菌中。被膜抗原存在于菌体表面，具有免疫原性，可刺激机体产生特异性抗体。

－致病性

绿脓杆菌为条件致病菌，当机体抵抗力下降时，可引起各种继发感染或混合感染，是医院感染的主要病原菌之一，近年来对动物感染的报道逐年增加。绿脓杆菌常为天然广谱耐药菌株。

Pseudomonas aeruginosa is an opportunistic pathogen. The bacteria takes advantage of an individual's weakened    immune system to create an infection and this organism also produces tissue-damaging toxins.

Pseudomonas aeruginosa causes urinary tract infections, respiratory system infections, dermatitis, soft tissue infections, bacteremia, bone and joint infections, gastrointestinal infections and a variety of systemic infections, particularly in patients with severe burns and in cancer and AIDS patients who are immunosuppressed.

(二)分离与鉴定

1 常规检验法 根据绿脓杆菌对营养要求不高、在普通琼脂和血平板上的菌落特性及产生绿脓素等特点，不难进行鉴定。但对不产生色素者，尚需进行生化和血清学试验予以检查。

2 血清学反应 除常规检查法外，鉴定绿脓杆菌还采用间接血凝试验(IHA)、协同凝集试验及ELISA等方法。

(1)间接血凝试验(IHA)：是用经鞣酸处理的绵羊红细胞吸附OEP作为致敏抗原，测定血清中抗OEP抗体效价。该方法非常敏感，血清稀释到上万倍仍可检出抗体。

(2)协同凝集试验：此法用于检测细菌本身并分型。用SPA—绿脓杆菌分型血清，与待检菌的3～6h培养物作玻片凝集试验。与普通玻片凝集试验相比，本方法不仅可缩短时间(15～18h)，还可提高分型率。

(3)ELISA：此法用于检测绿脓杆菌滤液LPS，且不受其它革兰氏阴性菌LPS的影响，特异性强。

三、污染食品的其它常见假单胞菌

(一)荧光假单胞菌(Ps. fluorecens)

荧光假单胞菌为革兰氏阴性单个或成对排列的杆菌，形态类似绿脓杆菌。单端丛毛，运动活泼。本菌专性需氧，温域4～30℃，最适温度25～30℃，在37℃或42℃不生长，但常可耐受37℃。因此，除低温培养外，通常荧光假单胞菌的检出率较低。营养要求不高，在普通琼脂上生长，也可在麦康凯琼脂和SS琼脂上生长。菌落呈浅黄绿色，在紫外线照射下呈现荧光。少数菌株无荧光，只有黄色或绿色色素，但不是绿脓素。产生荧光素的菌株约有94%，该色素水溶性，但不溶于氯仿。氧化酶阳性；能氧化分解葡萄糖、木糖，产酸不产气；能液化明胶；水解精氨酸；能利用醋酸盐为唯一碳源。

图： A scanning electron micrograph of the aerobic soil bacterium Pseudomonas fluorescens. The bacterium uses its long, whiplike flagellae to propel itself through the water layer that surrounds soil particles.

(二)腐败假单胞菌

腐败假单胞菌是腐物寄生菌。一端单鞭毛，有的有侧鞭毛，运动活泼。无芽孢，无荚膜。本菌需氧，对营养无特殊要求，铵离子可作为唯一氮源，醋酸盐可作为唯一碳源和能源。在22～30℃生长良好，4℃可生长，42℃生长不定。在琼脂培养基上可形成淡红褐色或粉红色、略带黏液样菌落。在卵黄琼脂、DNA酶琼脂和假单胞菌琼脂P培养基上，可产生淡红褐色荧光色素。在假单胞菌琼脂F上则产生黄色水溶性荧光色素。由于本菌能产生硫化氢，能使三糖铁琼脂底部变黑，易与沙门氏菌、变形杆菌相混淆。氧化酶阳性；DNA酶阳性；鸟氨酸脱羧酶阳性；能分解葡萄糖，但有些菌株迟缓分解或不分解。

本菌在自然界分布广泛，存在于土壤和水体中。可自牛乳、乳酪、蛋品、河水、污水、组织培养液、油乳剂、天然气、石油产品中分离到。能使乳酪、蛋品、鱼类腐败并产生硫化氢。

(三)嗜麦芽假单胞菌(Ps. maltophilia)