血培养检测规范化操作(3)

 

血培养检测--阳性结果的处理：

传统手工法血培养应该每天至少检查一次，对48h~72h未生长的培养瓶至少应进行需氧传种培养一次。对培养瓶进行肉眼检查，注意下列几点提示有微生物生长：

1． 血与肉汤混合物出现浑浊。

2． 在血液层上有絮状沉淀，某些链球菌在沉积的红细胞表面上，会有小的“棉球样”生长。

3． 肉汤内出现浑浊生长。

4． 肉汤表面有薄膜生长。

5． 出现溶血。

6． 产生气体，许多发酵菌可产气，梭菌属会产生大量的气体，出现明显的溶血现象。

7． 血液层表面或深层有白色颗粒。

8． 液体培养基凝固。

 

如果怀疑血培养阳性，应立即进行革兰染色，以无菌手续从培养瓶中取肉汤2~3滴涂片，自然干燥，加热固定并染色。染色结果应尽快报告，如革兰阳性球菌为成对或成堆或成链，革兰阴性杆菌为小杆菌或球杆菌等。革兰染色结果可指导医生为患者经验选择抗生素治疗，并作为实验室进行细菌鉴定补充试验的参考依据，它对于鉴别葡萄球菌和链球菌非常有用。如果血培养阳性革兰染色未发现细菌，应做吖啶橙染色进行二次镜检，这对检测弯曲菌菌血症和布鲁菌菌血症很有帮助，而革兰染色很少发现这些细菌。依据细菌革兰染色形态特点，选择适当的培养基传种，见表1。

表1。 血培养阳性后根据革兰染色特点应传种培养基种类的建议

染色特点 5%~10%CO2孵育 　 厌氧气体孵育ª

血琼脂 巧克力琼脂 中国兰或麦康凯或EMB 血琼脂 PEA或CAN

革兰阳性

球菌 × × ×

杆菌 × × ×

革兰阴性

球菌 × × × ×

杆菌 × × × × ×

真菌b × ×

持续检测阳性 × × ×

革兰染色阴性c

ａ所有培养至少至48h；EMB；伊红美蓝琼脂；PEA；苯乙基醇琼脂；CAN；多粘菌素-萘啶酮酸琼脂。

ｂ增加真菌培养基（如：沙保弱葡萄糖琼脂）和30℃培养。

ｃ接种硫羟乙酸盐肉汤中。

当革兰染色显示细菌形态均一时，厌氧培养的价值不大。对所有培养阳性，革兰染色阴性的血培养瓶，再次上机检测之前都应传种厌氧和需氧培养皿。

革兰染色为纯的细菌，可进行初步鉴定并做直接抗生素药敏试验的标准程序，而且没有经FDA批准的市售产品。可用于初步鉴定的商品试剂，包括：胆汁溶解，DNA酶，乳胶凝集分型实验等。

美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）推荐的抗生素敏感试验没有血培养直接敏感试验法。然而，许多学者提出：根据革兰染色初步分析鉴定，可以灵活地选择抗生素进行直接抗生素药敏试验。

对各种血培养法中的阳性肉汤培养物进行传种并且立即孵育培养，为进一步试验用，传种5h-7h后有明显的菌落生长，取琼脂表面的菌落用于细菌鉴定和抗生素敏感试验。使用含固体培养基的血培养系统，如：双相法，有菌落生长可直接进行细菌鉴定和标准的抗生素敏感试验。

尽管现在使用探针杂交和DNA扩增技术可以鉴定血培养中的细菌和检测抗生素敏感性，但这种技术不实用，价格昂贵，FDA不推荐常规使用。

血培养分离的细菌，万一需要进一步的研究，至少保存几个星期。为了让细菌活着，兼性需氧菌和兼性厌氧菌应传种到半固体培养基中，例如动力培养基。严格厌氧菌应保存到无葡萄糖的肉汤培养基或冷冻在兔血或脱脂牛奶培养基中。柯养菌可以接种到巧克力琼脂斜面上并用矿物油封存。为长期储存，细菌可悬浮于15%甘油肉汤中并-70℃冷冻。

 

血培养阳性结果的报告程序：

血培养阳性结果十分重要，应立即口头报告给患者的主治医生，报告的日期和时间以及接受报告人的姓名应记录在患者的报告单上。应向临床医师提供重要的信息，包括革兰染色的形态，血培养阳性的数量和其他的鉴定资料，如革兰阳性球菌可疑为葡萄球菌。处理报告之前，应回顾一下患者近期标本的培养情况，这些结果有助于解释感染微生物来源。口头报告后应立即进行书面初步报告。除非初步报告有错误或新发现可改变患者的治疗方案，否则不应更改初步报告的结果。

当培养24h和48h后，对阴性血培养结果在最短的时间内发出初步报告。有些实验室以培养的时间长短发初步报告，例如：“血培养3天后无细菌生长”。

 

 

 

血培养检测 真菌培养：

多种方法可提高血液中真菌的检出率，包括使用通气的真空血培养瓶、双相培养基、裂解-离心技术和特殊营养的肉汤培养基（如脑心侵液肉汤等）。裂解-离心技术是一种分离真菌的有效方法，特别是对于营养要求可可的双相真菌。实际上，大多数需氧的血培养瓶（通常孵育5至7天）可提供充足的营养支持白色念珠菌的生长。然而对于其他念珠菌属、光滑球拟酵母菌、新型隐球菌、荚膜组织胞浆菌和其他双相真菌，使用裂解-离心技术可获得最高的检出率。霉菌抑制琼脂、脑心侵液琼脂和巧克力琼脂通常与lsolator管结合使用。对于分离糠秕鳞斑霉，可在培养基表面覆盖一层橄榄油或其他长链脂肪酸。阴性的真菌血培养应于22-30℃孵育4周后再仍弃.