临床病原体检查的常用方法（2）

㈡病毒感染检查

 

     1、病毒的形态观察：光学显微镜下只能观察到大型病毒（如痘病病毒）和病毒感染后人体细胞胞质或胞核内出现的包涵体，根据包涵体的特点，如巨细胞病毒感染后可在上皮细胞的核内周围绕有一轮晕似“猫头鹰眼”样的嗜酸性包涵体；电子显微镜可直接观察到临床标本或培养物中有特征性的病毒颗粒，如轮状病毒、疱疹病毒、冠状病毒等。

 

     2、病毒培养：由于病毒（virus）是专性细胞寄生，需要在活细胞或动物体内才能分离培养，一般通过活组织培养、鸡胚接种和动物接种，最敏感而特异的方法为鸡胚接种。根据培养过程或动物接种后的变化特征、流行病学资料和标本来源可进行初步鉴定，有助于确定病毒的种类，但常需结合血清学试验鉴定。病毒的分离培养与鉴定比细菌更为复杂，一般实验室较少开展。

 

 

 

     3、病毒抗原检测：用免疫荧光或免疫酶等技术检测标本中的特异性病毒抗原，如血清中的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）等。

 

 

     4、分子生物学诊断     ⑴病毒感染的诊断及疗效观察：检测病毒核酸的序列或特异基因可确定存在病毒核酸，但是否为有感染性的病毒颗粒则有待进一步确认。应用PCR和分子杂交技术可以直接扩增和分析DNA病毒的特异性片段；RNA病毒则应用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术，先逆转录为cDNA再行PCR扩增后检测；定量PCR可对标本中的病毒进行量化分析，对病毒感染的诊断和治疗观察有重要意义。例如，患者血清中检测到乙型肝炎病毒DNA（HBV-DNA）是诊断HBV感染最重要的依据。HBV感染后在检测到HBV表面抗原（HBsAg）的前2~4周即可查出HBV-DNA，故可诊断HBsAg阴性的HBV感染；通过定量PCR测定血清中HBV的载量（最低检出量可达20拷贝/ml），可以观察抗病毒疗效；急性乙型肝炎时，HBV-DNA先阳性，治愈后消失；慢性乙型肝炎时，HBV-DNA常持续存在，病毒载量或高或低。

 

 

     ⑵病毒的基因分型：不同病毒的DNA或RNA均有其特异的序列，同一种病毒的核苷酸组成具有一定的同源性，由此可以对病毒进行基因分型。例如：戊型肝炎病毒（HEV）为一种RNA病毒，在全世界发现的病毒株有7个主要基因型，各型之间的核苷酸同源性为74%~76%。 

 

    ⑶流行病学调查：检测感染病毒的基因型在不同国家或地区的分布特点，有助于分析流行毒株的变化特征。例如，不同地区的HEV基因变异较大，但同一地区的HEV基因序列则相对保守，这对HEV的诊断、研制疫苗、预防感染、临床治疗有重要价值。