弯曲菌属及其检验

 

1．弯曲菌属的主要特点及分类

 

弯曲菌属(Campylobacter) 是一类呈逗点状或S形的革兰阴性杆菌，广泛分布于动物界，其中有些可引起动物和人类的腹泻、胃肠炎和肠道外感染。

 

目前弯曲菌属共有18个菌种和亚种，引起人类疾病的主要是空肠弯曲菌空肠亚种，其次是胎儿弯曲菌和大肠弯曲菌等。

 

2．细菌特性

（1）形态染色 本属细菌为革兰阴性无芽孢的弯曲短杆菌，不易染色，菌体弯曲呈S状或海鸥展翅状等，一端或两端各有一根鞭毛，运动活泼，暗视野显微镜下呈“投标样”运动。

 

（2）培养特性 微需氧菌，最适生长环境是含氧气5％、二氧化碳10％、氮气85％；孵育温度通常取决于所需要分离的菌株，在不同的温度下培养基的选择性也不同，通常绝大多数实验室用42℃作为初始分离温度，这一温度对空肠弯曲菌、大肠弯曲菌的生长有利，相反其他菌株在37℃生长良好。

 

营养要求高，在普通培养基上不生长，分离弯曲菌常用的选择性培养基大多含有抗生素（主要为头孢哌酮），以抑制肠道正常菌群。常用的有含血的Skirrow培养基、头孢哌酮-万古霉素-两性霉素琼脂培养基（CVA）和不含血的碳-头孢哌酮-去氧胆酸盐（CCDA）、碳基选择性培养基（CSM）和半固体动力培养基等。

 

（3）生化反应 氧化酶和触酶阳性，可还原硝酸盐为亚硝酸盐，不分解和不发酵各种糖类，不分解尿素，具体生化反应见表13－1。

 

（4）抵抗力 本属细菌的抵抗力弱，对一般消毒剂敏感，但耐寒，在4℃冰箱或水中可存活达4周。

                    表13-1 弯曲菌属的生化特征

 

注：+，＞90％阳性；-，＜10％阳性；V，可变；ND，未定；W，反应较弱；S，敏感；R，耐药

3．临床意义

 

弯曲菌的传播途径主要为食物和水，传播方式多为经口传播，食用未煮熟的鸡、饮用未经处理的水和未经消毒的牛奶均可引起弯曲菌肠炎的发生。本菌具有黏附定居和入侵上皮细胞的能力，通过产生的肠毒素、细胞毒素和内毒素等多种毒力因子致病，病变部位通常在空肠、回肠，也可蔓延至结肠。

 

空肠弯曲菌空肠亚种是弯曲菌中最重要也是最常见的的人体致病菌（占弯曲菌腹泻的80％～90％），腹泻是空肠弯曲菌感染最常见的临床表现。除肠炎外，近年来也出现了空肠弯曲菌继发关节炎败血症、脑膜炎和格林巴利综合征。GBS病人分离到的空肠弯曲菌大都具有特殊的血清型O:19，可与人体的神经组织发生交叉免疫反应而致病。

 

 

 

胎儿弯曲菌主要引起肠道外感染，其中胎儿亚种和猫、绵羊的感染性流产关系密切，较少引起人类感染，感染人体常引起全身症状。

 

4．微生物学检验

 

（1）检验程序

 

（2）标本采集 可采集粪便、肛拭子及剩余食物，标本采集后应立即送检，或将标本接种于卡-布运送培养基中送检；对于高烧和患脑膜炎的病人，可于用药前抽取静脉血或脑脊液，注入布氏肉汤中送检。

 

（3）检验方法

 

1）显微镜检查 ①悬滴法动力检查：显微镜下观察有无螺旋状或投标样运动，脑脊液标本经离心沉淀后再制成悬滴标本检查；②染色标本检查：取新鲜粪便或脑脊液离心沉淀物涂片、革兰染色，查找革兰阴性、弯曲呈S状或螺旋状杆菌，鞭毛染色见一端或两端单根鞭毛；

 

2）分离培养 可将标本直接接种于选择性培养基上，也可将标本过滤后培养，弯曲菌形成的菌落为灰色、扁平、表面湿润、圆形凸起、边缘不规则，常沿穿刺线蔓延生长的菌落，在血平板上不溶血。本属细菌在布氏肉汤中呈均匀混浊生长。培养时需注意气体环境和适合的温度，空肠弯曲菌最适的温度为42℃～43℃，胎儿弯曲菌在42℃不生长。

 

 

3）鉴定 弯曲菌属的鉴定比较复杂，必须综合多种试验才能确定。通常在弯曲菌选择培养基上氧化酶阳性、革兰染色阴性、弯曲呈S形或螺旋形的细菌初步鉴定为弯曲菌，进一步的鉴定试验有：①马尿酸盐水解试验：本试验是鉴别空肠弯曲菌空肠亚种和多氏亚种的重要试验，在弯曲菌选择性培养基上经42℃孵育，氧化酶阳性、有特征性的弯曲菌形态、辅以马尿酸盐试验阳性即可报告为空肠弯曲菌空肠亚种；②醋酸吲哚水解试验：本试验空肠弯曲菌为阳性而胎儿弯曲菌为阴性；③萘啶酸、头孢噻吩耐药试验：空肠弯曲菌和大肠弯曲菌对萘啶酸敏感，对头孢噻吩耐药；胎儿弯曲菌对萘啶酸耐药而对头孢噻吩敏感。近来出现了对萘啶酸耐药的空肠弯曲菌和大肠弯曲菌，应结合马尿酸盐水解试验进行鉴定。

 

弯曲菌的其余鉴定试验有：不同温度的生长试验（25℃、37℃、42℃）、触酶试验、硝酸盐还原试验、产H2S试验等（见表13-1）。

 

（4）耐药性 由于弯曲菌感染大多呈轻症和自限性，一般不需特异性治疗。体外试验显示，绝大多数弯曲菌对头孢菌素和青霉素耐药，环丙沙星治疗弯曲菌感染非常有效，但近年来也出现了不少耐药菌株。空肠弯曲菌通常对红霉素敏感，其耐药率小于5％；而80％以上的大肠弯曲菌对红霉素耐药。胎儿弯曲菌引起的全身感染可用红霉素、氨苄西林、氨基糖苷类和氯霉素治疗。