幽门螺杆菌及其实验室鉴定(2)

 

 

2．临床意义

 

HP有较强的鞭毛动力和对胃黏膜/黏液有较强的黏附力，使HP能在接近中性的黏膜层中定植，产生强活性的尿素酶，分解尿素，在菌体周围形成保护性氨环境，以抵抗胃黏膜上皮细胞分泌的胃酸；HP产生的蛋白酶能有效分解黏液蛋白，提供营养。

 

HP在胃内定植后，通过对胃黏膜上皮细胞的黏附性、胃肠激素的作用、细胞壁脂多糖中脂质A的致炎作用、产生多种酶（包括：尿素酶、蛋白酶、过氧化氢酶、脂酶和磷脂酶等）以及产生的细胞毒素等等，这些因素的共同作用导致临床疾病的发生。在临床上主要引起消化性溃疡（十二指肠溃疡、胃溃疡）、慢性活动性胃窦炎等，长期感染易发展为萎缩性胃炎、胃腺癌和胃黏膜淋巴组织淋巴瘤。

3．微生物学检验

 

（1）检验程序。

（2）标本采集多部位采集胃、十二指肠黏膜标本，标本要新鲜，保持湿润，置2ml无菌等渗盐水中保存，在运送途中不超过3h，在4℃下最多保存5h。流行病学调查和检测治疗效果时可取血清检查。

（3）检验方法

 

1）显微镜检查 ①直接镜检：取胃、十二指肠黏膜活检标本作革兰染色，在油镜下查找细长弯曲或呈海鸥展翅状排列的菌体；由于涂片是在HP定植部位的黏膜进行观察，阳性率很高，是简便、实用、准确和较快速的诊断方法；②组织学切片：可行Warthin-Starry银染色、改良Giemsa染色、甲苯胺蓝染色、石炭酸复红染色等。

2）分离培养 用含5％绵羊血的布氏琼脂或加入7％马血的心脑浸液作为非选择性培养基，用改良的Skirrow琼脂（加入万古霉素10mg/L、两性霉素B10mg/L、甲氧苄啶5mg/L）作为选择性培养基，在含5％O2、10％CO2、85％N2的微需氧环境中37℃孵育3～5天，长出细小、灰白色、半透明、不溶血的菌落。

 

3）快速检查 ①快速脲酶试验：取一小块新鲜活检标本置于含尿素的培养基中，由于幽门螺杆菌产生大量的细胞外尿素酶（相当于普通变形杆菌的20～70倍），可分解尿素产大量的氨，使培养基pH升高，指示剂变色，能在5min~30min内检测出幽门螺杆菌；这是一种简便实用、快速灵敏且较为准确的检测Hp方法，适合胃镜检查的病人；②核素标记试验：本试验的敏感性和特异性均很高，但操作起来稍繁琐；③PCR：是一种高度敏感和特异的方法，但由于实验条件要求较高，目前仅用于实验研究；④抗原检测：可用已有的商品化试剂盒，用ELISA法直接检测HP的菌体抗原。

 

4）鉴定 本菌的鉴定主要通过典型的菌体形态，生长缓慢，仅于37℃生长。氧化酶和触酶阳性，脲酶强阳性，对萘啶酸耐药，对头孢噻吩敏感，在1％甘油和1％胆盐中均不生长。具体生化特征见表13-2。

4．耐药性 HP对多粘菌素、三甲氧苄氨嘧啶、磺胺、万古霉素和萘啶酸天然耐药。在体外药敏试验中，HP对许多抗生素都很敏感，但体内用药效果并不满意，主要因为HP寄生在黏液层下的胃上皮细胞表面，抗生素不能渗入胃黏膜深层。临床上治疗HP的药物有阿莫西林、甲硝唑、克拉霉素、四环素、呋喃唑酮等。