医院感染监控常用的检测方法(2)

4． 使用中消毒剂和无菌器械保存液的微生物学监测

（1） 采样时间： 采取更换前使用中的消毒剂与无菌器械保存液。

（2 ） 采样量及方法： 在无菌条件下，用无菌吸管吸取1ml被检样液，加入到9ml稀释液中混匀。醇类和酚类消毒剂用普通营养肉汤作稀释液。含氯消毒剂、含碘消毒剂、过氧化物消毒液需在检验地带网肉汤内加入0.1%硫代硫酸钠作稀释液。季铵盐类消毒液需在肉汤中加入3% Tween 80和0.3％卵磷脂作稀释液。含有表面活性剂的各种复方消毒剂需在肉汤中加入3％Tween 80作稀释液。常用消毒剂的中和剂见表6-3-2。

    (3) 细菌菌落总数检查：分别取1ml采样液放入2只灭菌平皿内，用普通营养琼脂作倾注培养，将其中一只平板置20℃培养7d,观察真菌生长情况；另一平板放37℃温箱内培养72 h计数菌落。 平板上有菌生长，证明被检样液有残存活菌，若每个平板菌落数在10个以下，仍可用于消毒处理（但不能用于灭菌）；若每个平板菌落数超过10个，说明每毫升被检样液含菌量已超过100个，不宜再用。

（4）判断标准：使用中消毒剂，细菌菌落总数≤100 cfu/ ml，病原微生物不得检出；无菌器械保存液必须无菌。

5． 医疗用品的微生物学监测

（1）采样时间：在消毒或灭菌处理后，存放有效期内采样。

（2）采样量及采样方法：可用破坏性方法取样的医疗用品，如输液（血）器、注射器和注射针等均参照《中华人民共和国药典》2000年版二部附录中“无菌检查法”规定执行。对不能检验地带网用破坏性方法取样的特殊医疗用品，可用浸有无菌9g/L氯化钠溶液的棉拭子在被检物体表面涂抹采样，被采表面<100 cm2，取全部表面；被采表面≥100 cm2，取100 cm2。

（3）无菌检查：参照《中华人民共和国药典》2000年版二部附录中“无菌检查法”。

（4）细菌菌落总数检查：1ml采样液放入灭菌平皿内，用普通营养琼脂作倾注培养，放37℃温箱内培养24~48 h计数菌落。

物体表面细菌菌落总数（cfu/ cm2）=   平板上菌落数×采样液稀释倍数×采样面积（cm2）

（5）判断标准：进入人体无菌组织、器官或接触破损皮肤、粘膜的医疗用品必须无菌。接触粘膜的医疗用品细菌菌落总数≤20 cfu/g或100 cm2, 不得检出病原微生物。

 

6． 血液和腹膜透析所用的水及透析液的微生物学监测

   （1）采样点：透析用水出口（ 自来水经过过滤、软化、活性炭吸附、去离子逆渗透等步骤处理后的出口）、透析液出口 （即透析结束时透析液离开透析器的出口）。如疑有透析液污染或严重感染病例，应增加采样点，如原水口、透析液配比机、反渗水出口、贮水罐出口、透析液进口等。

（2）细菌菌落总数检查： 取透析用水或透析液1ml放入灭菌平皿内，用普通营养琼脂作倾注培养，放37℃温箱内培养24~48 h计数菌落。

细菌菌落数（cfu/ ml）= 平板上菌落数×采样液稀释倍数×所取液体的容积（ml）

（3）判断标准：透析用水的细菌落菌总数≤100cfu/ml；透析结束时，透析液细菌落菌总数≤2000cfu/ml，并且无致热原物质存在。

 

7． 紫外线消毒效果监测

（1）紫外线灯管辐射强度值的测定：

开启紫外线灯5min后，按说明书*作，将测定波长为253.7 nm的紫外线强度测定仪（指定有效期内）探头置被检紫外线灯下垂直1m的中央处，仪表稳定后所示数据即为紫外线检验地带网灯管的辐射强度值。其中30W直管型紫外灯新灯管辐射强度值≥100μW/cm2，使用中辐射强度值≥70μW/ cm2； 30W高强度紫外线新灯的辐射强度值≥200μW/cm2。

（2）微生物学检测方法：开启紫外线灯5min后，将8片染菌玻片平放入灭菌器皿中，水平放于紫外线灯下适当距离照射，于4个不同间隔时间各取出2片染菌玻片，分别投入2支盛有5ml洗脱液（含1% Tween 80、1%蛋白胨的9g/L氯化钠溶液）试管中振打80次，经适当稀释后，取0.5ml洗脱液放入灭菌平皿内，用普通营养琼脂作倾注培养，放37℃温箱内培养48 h计数菌落。另取2片未作照射处理的染菌玻片分别投入2支盛有5ml洗脱液试管中振打80次，余按上述*作。

    计算细菌杀灭率（%）= 未照射染菌玻片回收菌数－紫外线照射染菌玻片回收菌数-   未照射染菌玻片回收菌数

（3）判断标准： 对指示菌杀灭率≥99.9%为消毒合格；对达到物理学检测标准时，作为消毒合格的参考标准。