一、实验目的要求
1 了解土壤微生物的分离纯化及测数的基本原理。
2 学习并掌握微生物分离纯化技术方法。
3 学习并掌握微生物平板菌落计数的技术方法。
二、基本原理
土壤是微生物生活的大本营，其中含有大量不同类型的微生物，可按照一定的方法将各类微生物通过分离进行纯培养，并能对特定类群进行数量测定。基本原理是通过稀释使菌体细胞充分分散，单细胞得以生长发育形成菌落，可使用稀释法或平板划线法进一步纯化，还可通过平板菌落计数，推算单位重量土壤样品含有微生物的数量。
三、实验步骤
（一）土壤样品采集
在待测田块上，若田块面积小于50平方米则按对角线三点采样，若田块面积大于50平方米按对角线五点采样。采样一般定点于耕作层0--20cm，先除去表土1--2cm，以无菌铲采土足量充分混匀后用无菌塑料袋分装。
（二）好气性细菌的分离纯化及测数
1.制备土样稀释液
吹吸三次混匀
无菌操作
另留一管不稀释留作对照（CK）
2.培养基的准备
融化牛肉膏蛋白胨培养基，融化后保温在48℃。并取6个无菌培养皿，分别在皿底贴好标签，注明10-5、10-6、CK（每个稀释度要两个平行皿，对照要两个平行皿）。
3.倾注法接种
先按10-6，10-5的顺序将不同稀释度菌悬液接入对应平皿中（每个平皿接入1ml），再向每个平皿倾注约15 ml的牛肉膏蛋白胨培养基（48℃）待冷凝，混合均匀。
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