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生孢梭菌计数



录入时间:2011-6-22 15:31:01 来源:互联网

 
菌悬液的浓度要求的确是每毫升小于100cfu,但是最好在50到100cfu之间,小于50的话容易出现假阴性。
 
其实无菌方法验证中的菌悬液的制备也是依中国药典(2005年版二部)附录XI H无菌检查法中“培养基灵敏度检查”项下的方法,制备成小于100 CFU/ml的对照用菌液。所以无论你做什么,菌悬液的制备方法都是一样的。
 
具体方法就是,先把生孢梭菌在硫乙醇中培养24小时,然后吸取1毫升培养液用生理盐水进行10倍稀释,我的经验是,稀释到10的-7次方就是在100cfu以下了,然后取至少200ml的硫乙醇酸盐培养基到试管里(要求无菌),然后接种1ml制备好的菌悬液到硫乙醇试管里,在32.5度下培养18h,然后开始计数。生孢梭菌在液体的硫乙醇里会长成梭子一样的单个菌落,这时拿的时候千万不要震动,然后开始计数(一个单独的“梭子”计一个菌落)。
 
注:如果培养时间太长会产生浑浊,不便于计数。如果震动试管也会浑浊。硫乙醇的量尽量大一点,这样便于计数。

 

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