中文版  |   English  |   加入收藏  |   客服热线:400-0532-596
微生物技术资料
文章检索
  首页 > 微生物知识->中国药典微生物检测->管碟法测定抗生素效价

管碟法测定抗生素效价



录入时间:2011-6-24 9:40:59 来源:互联网

 
 
一、目的和要求 
 
1. 了解管碟法的原理。
 
2. 掌握二剂量法测定抗生素效价单位的技术和计算方法。
 
二、原理
 
抗生素的生物检定是以抗生素对微生物的抗菌效力作为效价的衡量标准,具有与应用原理相一致、用量少和灵敏度高等优点。管碟法是琼脂扩散法中的一种,已被各国药典广泛采用,作为法定的抗生素生物检定方法。
 
当抗生素在菌层培养基中扩散时,会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度,即扩散中心浓度高而边缘浓度低。因此,当抗生素浓度达到或高于MIC(最低抑制浓度)时,试验菌就被抑制而不能繁殖,从而呈现透明的抑菌圈。根据扩散定律的推导,抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系。
 
三、实验材料
 
1. 四环素类抗生素的标准品和样品。
 
2. 试验菌:藤黄八叠球菌(Sarcina lutea)。
 
3. 培养基:250ml三角瓶分装150ml LB琼脂,150ml三角瓶分装50ml LB琼脂,50ml三角瓶分装20ml藤黄八叠球菌悬液用培养液。
 
4. 灭菌物品:培养皿,牛津杯(内径:6.0±0.1mm,外径:7.8±0.1mm,高度:10.0±0.1mm),滴管,1ml吸管,pH6.0的磷酸缓冲液,弯头镊子,15×150mm试管,瓦盖。
 
5. 其它:分析天平,容量瓶,玻璃板,水平仪,游标卡尺。
 
四、实验实施
 
1. 配制标准品溶液
 
2. 配制样品溶液
 
3. 制备菌悬液。
 
4. 制备平板:
 
(1)取6套无菌培养皿,分别加入约20mlLB培养基后,置水平玻璃板上凝固,作为底层。
 
(2)另取冷却至50℃左右的50ml LB培养基,加入1ml试验菌悬液,迅速摇匀后,用10ml破口吸管取6ml混菌培养基倒在底层平板上,作为菌层,并放置在水平玻璃板上凝固。
 
5. 在培养基平板底部作好相应标记,用弯头镊子在每个培养皿中等距离放入4个牛津杯。
 
6. 用滴管分别将高、低浓度的标准品和样品溶液加入到牛津杯中,以滴满为度,换上皿盖。
 
7. 将培养皿平稳送入恒温箱,37℃下培养16~18h。
 
8. 用游标卡尺测量抑菌圈直径

 

上一篇:复方磷酸可待因(欧博士止咳露)溶液微生物限度检查法验证实验

下一篇:无菌检查法-2015版中国药典

相关文章:
抗生素微生物检定管碟法在中国药典中的应用及操作要点 抗生素微生物检定——管碟法 1
管碟法的统计学分析方法
首页 | 关于我们 | 网上商城 | 在线客服 | 联系我们
业务联系电话
   400-0532-596 0532-66087773
   0532-66087762 0532-81935169
邮箱:qdhbywg@vip.126.com
地址:青岛市城阳区锦汇路1号A2栋
产品技术咨询
  工作日(周一至周六8:00-18:00):
  18562658263 13176865511
  其它时段:13105190021
投诉与建议:13105190021 13006536294