海水中噬菌体的分离

 

1 样品采集 

 

将一定的样品放入灭菌三角瓶中，加入对数生长期的敏感指示菌如大肠杆菌菌液3～5mL，再加20mL二倍肉汤蛋白胨培养液。

 

2 增殖培养 

 

30℃振荡培养12～18h, 使噬菌体增殖。

 

3 离心分离 

 

将上述培养液以3000rpm离心15～20min，取上清液，用pH7.0，1%蛋白胨水稀释至10-2～10-3，用于噬菌体检查及效价测定。

 

4 生物测定法

 

4.1双层琼脂平板法 

 

4.1.1 倒下层琼脂 

融化下层培养基，倒平板（约10mL/皿）待用。

 

4.1.2倒上层琼脂 

 

融化上层培养基，待融化的上层培养基冷却至50℃左右时，每管中加入敏感指示菌 (大肠杆菌) 菌液0.2mL，待检样品液或上述噬菌体增殖液0.2～0.5mL，混合后立即倒入上层平板铺平。

 

4.1.3恒温培养 

 

30℃恒温培养6～12h观察结果。

 

4.1.4 观察结果 

 

如有噬菌体，则在双层培养基的上层出现透亮无菌圆形空斑──噬菌斑。

 

4.2 单层琼脂平板法 

 

省略下层培养基，将上层培养基的琼脂量增加至2%，融化后冷却至45℃左右，如同上法加入指示菌和检样，混合后迅速倒平板。30℃恒温培养6～16h后观察结果。

 

4.3离心分离加热法（快速检查） 

 

取大肠杆菌正常培养液和侵染有噬菌体的异常大肠杆菌培养液，4000rpm离心20min，分别取两组发酵液的上清液(A1)，一部分于721分光光度计上测定OD650光密度值，另外各取5mL上清液于试管中，置水浴中煮沸2min（A2），检测A2溶液OD650光密度值，记录结果。