临床标本采集、处理与检测（2）

5.粪便标本的采集  粪便标本于急性腹泻期及未使用抗生素之前采取自然排出的粪便，挑选粘液、脓血部分，置无菌容器、保存液或增菌培养基中。可用肛门拭子。不能立即送检的标本应放入Cary-Blair运送培养基中。

 

（1）直接涂片检查 

 

 临床怀疑是霍乱弧菌、结核分枝杆菌感染或菌群失调需要大致估计菌群比例、二重感染（伪膜性肠炎、真菌性或葡萄球菌性肠炎）时进行直接涂片染色检查。

 

霍乱弧菌的涂片检查  取“米泔水”样粪便或肛门拭子涂片2张，干燥后用乙醇或甲醇固定，分别进行革兰染色和1：10稀释石炭酸复红染色，用油镜观察有无革兰阴性、鱼群样排列的弧菌。另外也可进行悬滴法动力试验和制动试验。

 

菌群失调及菌交替症  取粪便标本直接涂片，进行革兰染色油镜观察，根据菌群的形态和染色特征可大致描述菌群的情况。疑为伪膜性肠炎的患者标本中如发现大量革兰阳性呈葡萄状排列的球菌，则可报告“找到革兰阳性呈葡萄状排列的球菌”；如发现革兰阳性粗大杆菌、无荚膜，通常有位于菌体一端的卵圆形芽胞者，可报告“找到革兰阳性芽胞杆菌，疑似艰难梭菌”。

 

结核分枝杆菌  取半个指甲大小粪便块，与饱和盐水10~15ml搅和，静置，1~2h后取最上层液体作涂片，进行抗酸染色检查。

 

（2）分离培养

 

沙门菌属和志贺菌属  直接接种肠道强选择性培养基（SS琼脂、木糖赖氨酸去氧胆酸钠琼脂）和弱选择性培养基（如Mac Conkey、EMB、中国蓝琼脂）各1个；携带者的检查，可将粪便标本接种于GN增菌液（适用于沙门菌属和志贺菌属）和亚硒酸盐或四硫磺酸盐增菌液（适用于沙门菌属）增菌后转种于肠道强和弱选择性培养基上观察菌落特征。

 

霍乱弧菌 可疑标本接种于碱性蛋白胨水中进行35℃增菌，同时接种含糖双洗平板、庆大霉素琼脂平板或TCBS琼脂平板。增菌培养6h后，取增菌液表层菌膜移种于上述平板中进行分离培养，同时取增菌液作革兰涂片染色和悬滴法动力试验和制动试验。

 

副溶血性弧菌  取可疑粪便（或可疑食物）接种于副溶血性弧菌增菌液中，同时划线接种于副溶血性弧菌选择性平板和SS平板上。

 

肠致病性大肠埃希菌  取可疑粪便标本接种在中国蓝平板（或Mac Conkey平板或EMB平板）。

小肠结肠炎耶尔森菌  将可疑标本接种于新耶尔森菌选择培养基（NYE）、Mac Conkey及SS琼脂平板。带菌者可将标本接种于1/15mol/LpH7.4~7.8的PBS中，在4℃进行冷增菌。

 

空肠弯曲菌  取可疑粪便或在Cary-Bair运送培养基中的粪便标本接种于Camp-BAP血琼脂或Skirrow血琼脂，或接种于CEM增菌液在微需氧环境下培养18~24小时后接种上述平板，在微需氧环境下培养42~48h。

菌群失调及菌交替症  要对粪便中的所有菌群进行观察，将粪便定量接种在肠道选择性培养基、需氧和厌氧血平板，甘露醇盐琼脂，沙保弱培养基等，观察各菌群的生长情况，进行鉴定后报告各菌群比例。怀疑艰难梭菌的菌交替症时，如为黄色、夹有伪膜的粪便应立即接种CCFA平板，进行厌氧培养。如为绿色、海水样粪便，应怀疑为金黄色葡萄球菌感染，接种甘露醇盐琼脂，有黄色菌落按葡萄球菌鉴定。如为真菌性腹泻，常发生在抗生素使用之后，将标本接种在沙保弱培养基及血平板上，进行鉴定。

6.生殖道标本

 

男性尿道、生殖器分泌物  用无菌棉签将脓液采集在无菌试管中。由临床医师从肛门进行前列腺按摩，收集前列腺液。

 

女性生殖道标本  直视采集阴道后穹隆分泌物。盆腔脓肿的患者应消毒阴道后从后穹隆穿刺抽取脓液。子宫分泌物的采集采用双套管的方式插入子宫腔吸取分泌物。

 

外阴分泌物  对外阴部位的硬下疳,从其溃疡底部挤出少许组织液，以洁净玻片直接沾取，加盖玻片后送检。

 

涂片检查  对一般细菌和淋球菌的检查用革兰染色；梅毒螺旋体用暗视野显微镜或镀银染色法检查；结核分枝杆菌进行抗酸染色。

 

培养检查  一般细菌培养用血平板和Mac Conkey平板各一个；培养淋病奈瑟菌需要巧克力平板或卵黄双抗平板.

 

7.脓液、胸腹水及分泌物等其它标本

 

封闭性脓肿直接穿刺；疑为厌氧菌感染者，应立即将注射器内的空气排空，将针头插入橡皮塞中隔绝空气；开放性脓肿或瘘管从深部采取标本。标本直接涂片革兰染色发现细菌可以直接报告，然后用血平板接种培养。胸、腹水通过胸腔或腹腔穿刺获得，注入无菌试管中送检。