一、目的要求
1．学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法；
2．了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。
二、基本原理
多管发酵法包括初（步）发酵试验、平板分离和复发酵试验。
初（步）发酵试验：利用大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气的原理，但初发酵管24h内产酸产气和48h产酸产气的均需进行平板分离。
平板分离：采用伊红美蓝琼脂平板，使大肠菌群产生带核心的、有金属光泽的深紫色菌落。
复发酵试验：以上阳性菌落，经染色为革兰氏阴性无芽孢菌者，再次进行初发酵试验，经24h培养产酸产气的，最终确定为大肠菌群阳性结果。
三、器材
1、培养基：乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管），三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（瓶）（内有倒置小套管），伊红美蓝琼脂平板，灭菌水。
2、仪器或其他用具：载玻片，灭菌带玻璃塞空瓶，灭菌吸管，灭菌试管等。
四、操作步骤
1．水样的采取
2．自来水检查
（1）初（步）发酵实验
将水样分别接入三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（瓶）中，37℃培养24h，24h未产气的继续培养48h。
（2）平板分离
将经24h和48h培养后产酸产气的发酵管（瓶），分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37℃培养18～24h，将符合下列特征的菌落进行染色镜检。
深紫黑色，有金属光泽；
紫黑色，不带或略带金属光泽；
淡紫红色，中心颜色较深。
（3）复发酵试验
将镜检为革兰氏阴性无芽孢菌的菌株重复初步发酵试验。并根据初发酵管试验的阳性管（瓶）查表1，即得大肠菌群数。
3．池水、河水或湖水等的检查
分别将100ml、10ml、1ml原水样和经稀释成10－1、10－2的水样重复上述自来水的检查，其中100、10、1、10－1ml水样的发酵结果查表2，10、1、10－1、10－2ml水样的发酵结果查表3，即得大肠菌群数。
五、思考题
1．大肠菌群的定义是什么？
2．假如水中有大量的致病菌——霍乱弧菌，用多管发酵技术检查大肠菌群，能否得到阴性结果？为什么？
3．EMB培养基含有哪几种主要成分？在检查大肠菌群时，各起什么作用？
4．经检查，水样是否合乎饮用标准？
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