微生物技术资料
文章检索
  首页 > 微生物知识->病毒基本知识和检测方法->碘化物缓冲液提取噬菌体单链DNA

碘化物缓冲液提取噬菌体单链DNA



录入时间:2011-7-14 9:25:33 来源:互联网

碘化物缓冲液: 10 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM EDTA, 4 M NaCl。室温避光贮存。用的是NEB手册上写的方法。
1. 按上述方法进行噬菌斑扩增,在第一步离心后,将500 µl含噬菌体上清转入一新鲜离心管。
2. 加200 µl PEG/NaCl,颠倒混匀,室温放置10 min。
3. 离心10 min,弃上清液。
4. 短暂离心,小心吸去残余上清。
5. 沉淀物彻底重悬于100 µl碘化物缓冲液中,加入250 µl乙醇。室温温育10 min。短时间的室温温育使单链噬菌体DNA沉淀而大多数噬菌体蛋白保持在溶液中。
6. 离心10 min,弃上清。用70%的乙醇洗沉淀,短暂真空干燥。
7. 沉淀重悬于30 µl TE [10 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM EDTA]中。
8. 5 µl的上述模板溶液足够进行35S或33P标记的手工双脱氧测序, 或染料标记的自动循环双脱氧测序。根据测序方法的不同, 适当增减模板用量。
 
 
在用碘化物溶液提取噬菌体单链DNA过程中需要注意以下事项:
1.噬菌体上清是经过两次离心,并吸取上层80%液体得到,去除菌体。
2.操作过程在室温进行
3.沉淀要用NaI溶液彻底吹打
4.与碘化物温育时间不能超过10分钟
5.离心时间准确,不能太长
大量白色沉淀就是蛋白,主要是操作过程中不正确导致的噬菌体蛋白沉淀。
酚:仿提取核酸的方法不失为一种有效的方法,可以偿试用一下。

 

上一篇:pfu及噬菌体滴度测定方法

下一篇:烈性噬菌体(virulent phage)和温和噬菌体(temperate phage)

相关文章:
首页 | 关于我们 | 网上商城 | 加入收藏 | 在线客服 | 网站地图| 联系我们
地址:青岛市高新区锦汇路1号蓝湾创业园A2栋
电话:400-0532-596 0532-66087762
传真:0532-81935080 66087775
邮箱:qdhbywg@vip.126.com

产品技术咨询

电话:13176865511 18562658263

13105190021

投诉与建议
电话:13105190021 13006536294
邮箱:hopebiol@163.com
©2001- 版权所有 青岛高科技工业园海博生物技术有限公司 鲁ICP备05018323号