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微生物限度检查验证试验


录入时间:2011-7-21 15:20:41 来源:互联网

试验目的:进行微生物验证试验
背景知识(选填项目):
原理(选填项目):
实验仪器:高压蒸汽灭菌器、电子天平 、霉菌培养箱、电热恒温培养箱。
主体内容(操作步骤,必填项目):
1、菌液制备:参考中国药典2005年版一部附录微生物限度检查法的菌液的制备方法,采用10倍稀释法制备菌液。
(1). 接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌的肉汤培养物致至营养肉汤培养基中,置30~35℃培养18~24h,分别取上述培养物1ml加9ml0.9%的无菌氯化钠溶液,10倍稀释为10-4,细菌数约为50~100cfu/ml的菌悬液,做活菌计数备用。
(2). 接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中,经25 ℃培养24~48小时,取上述白色念珠菌霉菌液体培养物1ml加9ml0.9%的无菌氯化钠溶液,10倍稀释至10-5,细菌数约为50~100cfu/ml的菌悬液,做活菌计数备用。
(3). 接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中,取经25 ℃培养5~7天,加3~5ml0.9%的无菌氯化钠溶液洗下霉菌孢子,吸取出菌液, 用标准比浊管进行比浊后作为原液,然后取1ml加9ml0.9%的无菌氯化钠溶液,逐管10倍稀释为10-4,细菌数约为50~100cfu/ml的孢子悬液,做活菌计数备用。
(没有特殊要求的微生物限度检查,只需要培养枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌5个菌种。如需检沙门菌,则需要再培养乙型副伤寒沙门菌,如局部用栓剂等,菌种代数在5代以内。)
2、供试菌液的制备:参考中国药典2005年版一部附录微生物限度检查法的供试品液的制备方法,制备本品的供试品液。
平皿法:(常规法)
(1) 试验组:①取10个平皿,2个一组分成5组,分别做好大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉的标记。
② 取1:10供试品溶液1ml,分别加入10个平皿中,再依次加入上述5种菌的菌悬液1ml(50~100cfu),每株菌平行制备2个皿,立刻倾注营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基,分别置30~35℃培养48 小时和23~28℃培养72小时。
(2)菌液组:分别取上述稀释的菌液1ml注入平皿内,每个菌平行制备2个平皿,测定所加的试验菌数。
(3)供试品对照组:取1:10供试液1ml分别注入4个平皿中,立刻注入营养琼脂和玫瑰红钠琼脂培养基,每种培养基制备2个平皿,分别置30~35℃培养48 小时和23~28℃培养72小时,以测定供试品的本底菌数。
3、细菌、霉菌、酵母菌的方法学验证试验结果记录:
4、控制菌验证
(1)菌液制备:参考中国药典2005年版一部附录微生物限度检查法的菌液的制备方法,用10倍稀释法制备菌液。
(2)供试菌液的制备:参考中国药典2005年版一部附录微生物限度检查法的供试品液的制备方法,制备本品的供试品液。
(3)控制菌方法学考察结果表
 
结论:本品按中国药典2005年版一部微生物限度检查,经方法学验证试验,结果可用--- 法进行控制菌检验。

 

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