工业微生物的筛选和紫外诱变育种

录入时间:2011-8-1 14:24:16 来源：互联网

一．实验目的：加深对发酵工程上游技术中菌种选育的认识；学会常规选种和育种的方法，树立科学认真仔细的态度，培养科研协作精神。

二、实验原理：根据一定的生产目的如抗生素或酶类的生产，建立不同的筛选模型，并从特定的样品如土壤中筛选出高产适宜的菌株。

三．培养基及仪器：

降解亚硝酸盐培养基：NaNO2 0.2%，KH2PO4 0.7%，MnSO4.H2O 0.25%，Na2HPO4 1.35%，MgSO4.7H2O 0.1%，葡萄糖1％，琼脂2％，0.1MPa灭菌20分钟。6个250ml三角瓶，各装100ml培养基。

同时灭菌试管20支，1ml吸管12支，普通平皿60个，灭菌生理盐水。培养亚硝酸盐降解菌发酵液1瓶，每位同学准备1个斜面。

3．洁净工作台、培养箱、三角瓶、曲玻棒、平皿。

四．操作方法

课前半小时打开超净工作台灭菌。

1.土壤中降解亚硝酸盐细菌的筛选分离

稀释土样。5g土样，加入45ml无菌水中。为10-1，然后取1ml加入9ml无菌水，为稀释10-2，直至稀释至10-8溶化培养基。

将溶化后不烫手的培养基倒入平皿，刚好盖过平皿底部，迅速摇匀后放置，使培养基冷却，要求平皿培养基表面平整、光滑。吸取10-4，10-5或10-6相应浓度的土样稀释液0.5ml，加入平皿内，用烧过灭菌的曲玻棒均匀涂平，放入37℃培养箱中倒置培养48小时。

2.亚硝酸盐分解菌的紫外诱变育种

取10ml培养好的液体培养液，放入90 mm培养皿，将皿放置于诱变箱的磁力搅拌器上,置于30 W 紫外灯下，照射90 s，用无菌生理盐水稀释至10-6，10-7，10-8，按常规方法涂布筛选平板。

同学可自行选择培养亚硝酸盐降解菌和诱变菌。每位同学做一个平皿。并标记好稀释度、种类和名字。

五、实验进程安排及结果分析

（1）第1次实验：稀释土样，倒平板，冷却后进行平板涂布，放入恒温培养箱中；或进行菌种诱变，稀释诱变菌，倒平板，冷却后进行平板涂布，放入恒温培养箱中。然后紧接着进行第二个实验。

（2）第二次实验：同学回到实验室中，记录实验结果。培养24-48h后，记录观察到的菌落数量。并对其中2-5个不同菌落进行形态描述。挑取其中1个菌落，接入斜面培养基进行菌种保藏。