一、实验目的：掌握发酵罐的操作技能，学习微生物在发酵罐上发酵的过程和实验方法。
二、仪器
分光光度计、电热恒温水浴锅、生物发酵智能控制系统。
三、试剂
1、DNS试剂：取6.3g3,5-二硝基水杨酸（DNS）和262mL2mol/LNaOH溶液加到酒石酸钾钠的热溶液中（192g酒石酸钾钠溶于500 mL水中），再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌使其溶解，冷却后加水定容至1000mL，保存于棕色瓶中放置7天后使用。
2、10 g/L酪素溶液
3、种子培养基
4、产酶培养基
四、实验方法
1、学习发酵罐的使用方法。
2、发酵罐中加入培养基，灭菌。
3、接种、培养。
4、测定酶活:
a. 先将酪素溶液放入（40±0.2）摄氏度恒温水域中，预热5 min；
b. 按下列程序操作：
试管A（空白） （第二试管） 试管B（酶试样，作三个平行样）（第三试管）
↓ ↓
加酶液2.00 mL （移液管2ml） 加酶液2.00 mL
↓（40±0.2℃），2 min ↓（40±0.2℃），2 min
加三氯乙酸4.00 mL（摇匀）（移液管5ml） 加酪素2.00 mL（摇匀）
↓（40±0.2℃），10 min ↓（40±0.2℃），10 min
加酪素2.00 mL（摇匀）（移液管2ml） 加三氯乙酸4.00 mL（摇匀）
↓ ↓
取出静止10 min，过滤 （第四试管，小漏斗） 取出静止10 min，过滤
↓ ↓
在275 nm波长下，用 10 mm 在275 nm波长下，用 10 mm
比色皿测其吸光度 比色皿测其吸光度
（5）计算（=135）
X=A×K×8/2×1/10×n×E=2/5×A×K×n×E
式中 X——样品的酶活力（u/g） A——试样溶液的平均吸光度
K——吸光常数（K=135） 8——反应试剂的总体积（mL）
2——吸取酶液2.00 mL，以1 mL计 1/10——反应时间10 min，以1 min计
n——稀释倍数 E——紫外法与福林法的换算系数（取0.50）
五、实验进程安排及结果分析
（1）第1次实验：在实验老师准备的已灭菌培养基和罐体的前提下，观察罐上接种。同时熟悉罐的结构及每一部件用途。
（2）第2次实验：在下摇瓶测定发酵液中蛋白酶活力的同时，每位同学在发酵罐上取样，测定发酵液中蛋白酶活力。
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