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病原菌(1)



录入时间:2011-8-5 15:18:37 来源:百度

 

  主要病原菌的认识(一)

 

目的要求

认识结核分枝杆菌、布氏杆菌、炭疽杆菌、猪丹毒杆菌和多杀性巴氏杆菌的形态染色特性和培养特性。

操作步骤

一、结核分枝杆菌

取培养物抹片(如没有培养物可用卡介苗代替)、干燥、火焰固定,用齐一尼氏法作抗酸染色(方法见实验二),干后镜检观察。

(一)形态染色特性  本菌为革兰氏阳性细长或微弯杆菌,牛型比人型短而粗,禽型具多形性。无芽胞、无荚膜,不能运动,用齐一尼氏法作抗酸染色,镜检,红色细菌为抗酸菌,其他细菌为兰色。

(二)培养特性  本菌营养要求高,生长缓慢,需26周才能发育好,在甘油琼脂上形成干燥颗粒状,乳白色不透明叠起的菌落。

二、布氏杆菌

布氏杆菌的病料最好取新鲜流产胎儿的胃内容物,或用羊水、胎盘的坏死部分,阴道分泌物等,必要时也可取乳汁和尿进行检验。但乳汁和尿因含水较多,最好先用离心法沉淀,取其沉淀物进行镜检,分离培养或接种豚鼠。

取上述病料涂片(如无病料可用布氏抗原代替),用鉴别染色法着染后再进行镜检观察。

鉴别染色法常用以下两种:

(二)科兹洛夫斯基法  具体方法依次为:涂片、自然干燥、火焰固定,用2%沙黄(即番红花红)水溶液加温染色,出现气泡为止(约1.5分钟),充分水洗12分钟,再用1%孔雀绿水溶液染色0.51分钟(亦可用美兰液代替孔雀绿),水洗、干燥、镜检。

本菌呈红色,其他菌呈绿色(最好40分钟内镜检,经久则红色褪去)。

(二)改良齐一尼氏法  具体方法依次为:涂片、干燥、火焰固定,用稀释石炭酸复红液染色10分钟,水洗,再用0.5%的醋酸处理,不超过30秒钟,充分水洗,用1%美兰轻度复染20秒钟,水洗、干燥、镜检。

本菌呈红色、背景为兰色。

(三)形态染色特性  革兰氏阴性球状或小而短杆菌,多单在,少短链,无运动性,不形成芽胞和荚膜。用科兹洛夫斯基鉴别染色法,本菌呈红色,其他杂菌呈绿色。

(四)培养特性  流产布氏杆菌和绵羊布氏杆菌初代分离需在510CO2环境中始能生长(也可用燃烛法)。在肝汤琼脂上,72小时形成细小湿润、闪光、圆形隆起菌落。

血清肝汤琼脂内做振荡培养,36天后布氏杆菌在距表面0.5cm处形成带状生长。

三、炭疽杆菌

可取病料(血液、水肿液、脾、淋巴结或人工感染小白鼠死亡后的肝)或培养物进行涂片,待自然干燥,火焰固定后,病料用美兰或瑞特氏染色,培养物用革兰氏染色,干后镜检,观察。

(一)形态染色特性  革兰氏阳性大杆菌。在组织标本(病料制片)中单个存在或呈短链排列,有荚膜,无芽胞,菌体呈杆状,两端相连处呈竹节状,在人工培养物标本中,细菌呈长链排列,无荚膜,有卵圆的中央或偏端芽胞。

(二)培养特性  在普通琼脂上培养24小时,生成灰白色、扁平、毛玻璃样不透明菌落,边缘不整齐,呈卷发状,明胶穿刺,呈倒立松树状。

四、猪丹毒

病料采集:可疑猪丹毒疹块型取皮肤,败血型采取肾、肝、脾、心血、淋巴结和骨髓等检验,在实验中常用本菌培养物(肉汤或固体培养基加生理盐水稀释)注射小白鼠或鸽(在鸽体内菌形很大)死后取肝、心血涂片,自然干燥后用瑞特氏或美兰染色(方法见实验二),待干后,镜检观察。

(一)形态染色特性  革兰氏阳性,平直或微弯的细小杆菌,细菌散在或簇集于白细胞中,在慢性猪丹毒心内膜疣状物上,多呈长丝状,不运动,不形成荚膜和芽胞。

(二)培养特性  在血琼脂上2448小时后生成针尖大露滴样圆形小菌落,菌落无色透明,周围可形成狭窄的绿色溶血环。在普通琼脂上生长不佳,明胶穿刺不液化,呈试管刷状生长。

五、多杀性巴氏杆菌

尽可能采取新鲜病料(心血、肝、脾、淋巴结、骨髓等)制成涂片,在实验中,可用本菌的肉汤培养物注射小白鼠或鸡,死后,取肝涂片,自然干燥后,再用瑞特氏或碱性美兰染色,待干后镜检观察。

(一)形态染色特性  革兰氏阴性球杆菌,菌体两端钝圆,常单在,有时成双,组织抹片用碱性美兰或瑞特氏染色,干后镜检观察,本菌呈典型明显的两极着色。

(二)培养特性  血琼脂上生长良好,24小时可形成淡灰色、圆形、光滑湿润、边缘整齐露珠样小菌落,不溶血。

 

 

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