病毒学实验技术（3）

组织培养

培养病毒的组织培养技术，都是下列5种基本方法的改良：

（一）悬浮细胞培养法（Snspended—cell method）  这是一个古老但现在仍在继续

应用的方法，常用于口蹄疫病毒的培养。

（二）血浆凝块培养法（Plasma—dot method）  应用凝固血浆（经常是鸡血浆）使组织块贴附在玻片或试管壁上。先在玻璃表面涂布一层血浆膜，加入胚胎浸出液使其凝固。将组织块置入这一基质内，即能贴附于玻璃表面并增殖。应用这一方法可以看到细胞增殖，并可测量组织块的生长情况。这类培养物中的病毒生长，可根据下列几种方法测知：

（a）取培养物的液体或细胞作为病毒样品，接种于已知能发生感染的易感动物；（b）注意其对细胞代谢的影响（亦即对某些代谢路径的抑制）；（c）观察细胞死亡（坏死）；（d）检测是否有血凝素存在；（e）对细胞或提纯的液体进行电子显微镜检查。

（三）单层细胞培养（Monolayer cell cultures）  静止的试管培养是病毒学中最常用的方法。这些培养物是用胰酶分散的组织制备的（来自适用的特殊来源,如肾、睾丸、皮肤、肿瘤以及其他组织）。这种培养物内含有小的细胞团块和单个细胞。将组织用剪刀剪碎，并用盐水冲洗，除去血细胞和细胞碎屑后将其置于胰酶溶液内，并用磁力搅拌装置不断搅拌。当细胞分散时（具体时间随胰酶消化的温度和所用组织而不同），稍予离心沉淀，用营养液冲洗2～3次，除去胰酶，用几层纱布过滤后进一步稀释，使每m1中含有足够量的细胞，以保证良好的生长（细胞的具体数量随细胞种类而不同），并分装培养于试管内。

由肾组织制备的细胞悬液能在静置的任何玻璃表面（平皿或试管或玻璃瓶）产生丰盛的单层细胞。这样制备的试管培养物可用于病毒的分离、滴定、中和试验以及研究病毒在细胞内的生长。

（四）直接培养（Direct cultures）  这种培养方法与单层细胞培养相同。在尸体剖检时采取组织或者采取活体组织，用以制备单层细胞培养物，以提高病毒分离的机会，特别是在组织内的病毒可能很少或者因存在抗体而使病毒呈不活动状态时。应用的胰酶应尽可能少，因为有些病毒可被胰酶灭活。

（五）器官培养（Organ cultures）  用于接种可疑病毒材料的器官培养物，也可以如前所述那样直接用病变组织制备。

现在最常用的是单层细胞培养，培养病毒以同种动物细胞为佳（即牛的病毒用牛的细胞），以肾细胞较常用，胚胎细胞较幼年动物的细胞好，幼年动物的细胞又较成年动物的细胞好。

细胞培养对玻璃器皿洗涤要求很高，彻底洗净后用蒸馏水冲洗，再用双馏水冲洗，干燥灭菌后备用。所有溶液均用双蒸馏水配制，所用药品试剂要用高质量的分析纯试剂。操作过程中，严格要求无菌。

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