病毒的血球凝集及血球凝集抑制试验

有些病毒，能凝集某种动物的红血球，故可以此来推测材料中有无该病毒的存在。

如有能凝集血球的病毒，其凝集性可为相应的抗体抑制，这种抑制具有特异性，故病毒的血球凝集抑制试验，可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体，也可用已知血清来鉴定未知病毒。

由于只是一些病毒有血凝性，故血凝或血凝抑制试验只能用于那些有血凝性的病毒。

现以新城疫病毒为例。

（一）需要材料

1．病毒  弱毒的鸡新城疫疫苗，通过鸡胚繁殖后所收获的绒毛尿囊液。

2．已知阳性血清  将弱毒苗初次免疫鸡后，以后每周肌肉注射按规定稀释好的疫苗1ml，四次。末次注射后2周，心脏采血，分出血清，血凝抑制价可超过1:1280，加硫柳汞后在冰箱中可保存5年以上。

3．被检血清  从被检鸡的翅静脉或心脏采血，分出血清。

4．鸡血球  采鸡血，抗凝，洗血球，配制成0.5％鸡血球生理盐水液。

（二）操作方法

1．微量红血球凝集试验（HA）

（1）用定量稀释器于每排各孔中加PBS0.05ml。

（2）以稀释器吸取1：5稀释的抗原0.05ml于第一孔，反复挤压3～5次后，吸0.05ml于第二孔，依次倍比稀释至第11孔；弃去0.05ml。第十二孔不加抗原作为对照。

（3）再用带新塑料吸嘴的稀释器吸取0.5％红血球悬液依次加各孔，每孔0.05ml。

（4）置微量振荡器上振荡1分钟，或用手轻轻摇振，混匀。

（5）置室温下（18～20℃）作用30～40分钟。

依据血球凝集程度判定反应结果，以出现完全凝集的抗原最大稀释度为该抗原的血球凝集效价。

2．微量红血球凝集抑制试验（HI）

能凝集红血球的病毒，其凝集性可为相应的抗体所抑制，这种抑制具有特异性，称为红血球凝集抑制试验。病毒的血球凝集抑制试验，可用已知的血清来鉴定未知病毒（即α－血球凝集抑制试验），也可以用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体（即β－血球凝集抑制试验）。其中以β－微量法红血球凝集抑制试验最常用。

β－微量法HI试验多在96孔微量反应板上进行，具体操作(表20-2)为：

（1）用定量稀释器取PBS0.05ml，加入每一排的第1孔，8个血凝单位浓度的抗原0.05ml于第2孔，再取浓度为4个血凝单位的抗原0.05ml依次加入第3～12孔。

（2）用定量稀释器吸取待检血清0.05ml于第1孔中，反复混匀后吸0.05ml于第2孔，依次倍比稀释至第11孔，最后弃去0.05ml，第12孔不加血清，作抗原对照。

（3）置室温下作用20分钟。

（4）加0.05ml0.5％红血球悬液于各孔中，轻轻振荡混匀后，置室温下30～40分钟。

依据血球凝集抑制程度判断结果。以完全抑制红血球凝集的血清最大稀释度为该血清的血球凝集抑制效价。如果以2为底的负对数（-log₂）表示，其血凝抑制效价恰好与反应板上出现完全抑制的最高孔数相一致。

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