放线菌制片及形态观察

目的要求

学会放线菌制片方法，观察其形态特征。

材料

1. 菌种：细黄链霉菌（Streptomyces microflavus）马铃薯平板培养3～4天。

2. 染料：石炭酸复红液、美兰液。

3. 其他：显微镜、载玻片、接种针、香柏油、二甲苯等。

原理

放线菌是单细胞核微生物，菌丝体分为营养菌丝和气生菌丝两部分。部分气生菌丝的顶端会分化成孢子丝，呈螺旋状、波浪状或分枝状等。在孢子丝顶端产生孢子，孢子常呈球形、椭圆形或杆形等，气生菌丝和孢子的形状、颜色常作为分类的依据，放线菌的菌丝的宽度与细菌类似，必须染色后才能进行观察。

方法

1．营养菌丝的制片与观察

（l）用接种针取细黄链霉菌菌落（连同培养基一起）置于载玻片中央。

（2）另取一块载玻片用力将其压碎，弃去培养基，制成涂片，干燥、固定。

（3）用美兰染色液或石炭酸复红染色液染色30～60秒钟，水洗、干燥、用油镜观察营养菌丝的形态。

2．气生菌丝、孢子丝的观察

将培养皿打开，放在低倍镜下寻找菌落的边缘，直接观察气生菌丝和孢子丝的形态（分枝、卷曲情况等）。

3．孢子链及孢子的观察（印片法）

取洁净的盖玻片一块，在菌落上面轻轻地压一下，然后将印有痕迹的一面朝下，放在滴有一滴美兰液的载玻片上，使孢子等印浸在染色液中，制成印片。用油镜观察孢子链及孢子的形态。

4．埋片法的制片观察

（1）在马铃薯浸汁琼脂培养基平板上，划线接入少量细黄链霉菌的孢子，在接种线旁倾斜地插入无菌盖玻片，于28～30℃培养。

（2）培养3～4天后，菌丝沿着盖玻片向上生长，待菌丝长好后，取出盖玻片放在干净的载玻片上，置于显微镜下观察。

内容

按上述方法制片观察细黄链霉菌的营养菌丝、孢子丝、孢子链及孢子的形态。

作业

1. 将观察结果绘图，并注明各部位名称。

2. 比较各种方法的优缺点；在何种情况下，适宜用何种制片方法来观察，效果最好。

3. 放线菌的菌体为何不易挑取?

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