病毒的细胞培养

病毒的严格细胞内寄生性决定培养病毒必须使用活细胞，实验动物、鸡胚和细胞培养可提供病毒增殖所需的大量活细胞，尤其是细胞培养。

（一）、细胞培养的特点

在体外将组织细胞分散成单个细胞再培养长成的细胞为细胞培养，得以用于病毒学研究、诊断及疫苗制备等方面。由于细胞培养(cell culture)源自组织培养(tissue culture)，现组织培养和细胞培养基本看作是同义词，前者是包括后者在内的更广义的动物细胞、组织、器官的离体培养。利用细胞培养来增殖病毒具有以下特点：

1. 细胞培养中的每个细胞具有基本一致的生理特性，对病毒的易感性相同，没有实验动物的个体差异。

2. 可用于试验的数量远远超过动物或鸡胚，并且易于人工控制，可在无菌条件下进行标准化的试验，重复性好。

3. 病毒增殖可通过观察细胞产生的变化如细胞病变等来判定结果，也可结合免疫学技术检测细胞内有无增殖的病毒。

4. 用细胞培养可从感染动物组织内分离病毒并进行病毒克隆，以分离获得纯化的单一毒株。

（二）、细胞培养的类型

1. 原代细胞(primary cell)：动物组织经胰蛋白酶等消化、分散，获得单个细胞，再于培养器皿中生长的细胞。最好用SPF动物组织，以避免携带潜伏的病毒。

2. 二倍体细胞株(diploid cell strain)：将长成的原代细胞消化分散成单个细胞，继续培养传代，而获得其染色体数目与原代细胞一样的细胞株，即为二倍体细胞株。这种细胞株不能无限传代，并且有些细胞难于获得二倍体细胞株。

3. 传代细胞系(established cell line)：由肿瘤组织或转化细胞培育而成的染色体数目异常、可无限传代和性状稳定的细胞株。传代细胞系具有传代及培育简便、应用广泛等优点，但也具有对分离野毒不敏感、易于污染霉形体或隐性感染病毒以及致肿瘤的潜在危险等缺点，因此传代细胞系一般不能用于制备疫苗，尤其是人用疫苗。

（三）、细胞培养的方法

1. 静置培养(stationary culture)：将消化分散的细胞悬液分装于培养瓶或培养板，封闭，静置于恒温箱内培养数天，可生成贴壁的单层细胞。

2. 旋转培养(roller culture)：除细胞培养瓶不断缓慢旋转(5～10 r/min)外，基本方法同静置培养，经恒温培养数天后，可在细胞培养瓶的四壁长满单层细胞。此法的细胞产量高，适用于疫苗生产。

3. 悬浮培养(suspensive culture)：通过搅拌使细胞处于悬浮状态，并补充营养和校正pH，使生长细胞不贴壁而处于悬浮状态。

4. 微载体培养(micro-carrier culture)：在悬浮培养的基础上，让细胞在对细胞无毒性、直径35～100 mm微小颗粒上长成单层细胞。此法由于细胞数大为增加，对规模化的细胞或疫苗生产很有吸引力。

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