植物病毒病检测方法（二）

1.4.2血清学方法

血清学方法原理是利用抗原抗体的体外特异性结合检测植物病毒。主要包括沉淀反应、凝聚反应、酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫电镜（IEM）、放射免疫测定（RIA）、PCR（聚合酶莲式反应）法等。

沉淀反应 将可溶性抗原与相应的抗体混合，当两者的比例合适，并有盐类存在时，即有沉淀物出现，叫做沉淀反应。由于沉淀物主要是由抗体球蛋白所组成，为了保证有足够的抗体，因此试验时通常要稀释抗原，不稀释抗体。

凝聚反应 在微生物细胞悬液中，加入含有特异性抗体的血清，有一定浓度的电解质，微生物细胞凝聚成团，叫做凝聚反应。分为直接凝聚反应与间接凝聚反应。由于病毒是可溶性抗原，必须把病毒的抗体先吸附于一种与免疫无关的颗粒表面，然后与相应的抗原结合反应。用于吸附抗体的颗粒有皂土、乳胶、炭末、红细胞等。

酶联免疫吸附试验（Enzyme linked Immunosorbent assay，简称ELISA）将酶标记物同抗原抗体复合物的免疫反应与酶的催化放大作用相结合,既保持了酶催化反应的敏感性,又保持了抗原抗体反应的特异性,因而极大的提高了灵敏度；同时它又是一种非均相分析过程,即在反应中的每一步之后都有洗涤过程,从而排除了未反应物质的干扰。自1976年 Voller和Clark等首次将ELISA应用于植物病毒检测,已形成多种测试方法。常用的方法有有细胞直接法、细胞间接法、竞争法、酶抗酶法、双夹心法（Double sandwich method）、双抗体夹心法（Double antibody sandwich method）测定方式(侯义龙,2000)。这种方法的灵敏度高（可测出1－10纳克/毫升的浓度），特异性强，操作简便，已广泛应用于病毒测定和诊断（盛树力，1978；马德芳等,1981）。

免疫电镜（IEM）是用电镜检测抗体特异性结合于抗原的技术。Anderson等（1961）和Lafferty与Oertelis（1961）发展了这一方法。其灵敏度高于ELISA。

放射免疫测定（RIA）在抗原抗体反应体系中，当同位素标记抗原（Ag*）与有限量的抗体相互作用时，形成有标记抗原的复合物（Ag*Ab）。如下式所示：

Ag*＋Ab Ag*Ab

Ag AgAb

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